用石英晶体微天平研究酪蛋白在不同固液界面上的固定化及酶解行为.pdfVIP

第 12卷第3 期 过 程 工 程 学 报 Vol.12 No.3 2012 年 6 月 The Chinese Journal of Process Engineering June 2012 用石英晶体微天平研究酪蛋白在不同固液界面上的固定化及酶解行为 1,2 1 2 2 2 2 2 2 冯晓毅 ，秦培勇 ，葛 佳 ，王 平 ，马光辉 ，苏志国 ，高 飞 ，张松平 (1. 北京化工大学生命科学与技术学院，北京 100029 ；2. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190) 摘 要：使用石英晶体微天平(QCM)研究了酪蛋白在聚苯乙烯、Au 和 SiO 三种芯片表面上的吸附与酶解行为. 结果 2 2 表明，酪蛋白在聚苯乙烯表面具有较高的非特异性吸附，吸附量为 127.9 ng/cm ，而在空白Au 和 SiO 表面几乎没有 2 非特异性吸附. 通过对 Au 和 SiO2 表面进行修饰和活化，酪蛋白可共价固定化在其表面，固定化量分别为 178.0 和 2 . 用胰蛋白酶对吸附的酪蛋白水解后，再用表面活性剂洗涤，可以完全去除聚苯乙烯表面的酪蛋白和其 1718.0 ng/cm 酶解产物，而单独使用表面活性剂仅能洗涤约 36%吸附的酪蛋白. 建立了用 QCM 测定胰蛋白酶在固液界面酶解酪蛋 白酶活的方法，对共价固定化在修饰后 Au 和 SiO2 表面上的酪蛋白，胰蛋白酶的水解活性分别为 0.010 和 0.157 U/mg， 远低于水解游离酪蛋白的 17.8 U/mg. 关键词：石英晶体微天平；界面吸附；酶解；酪蛋白；胰蛋白酶 中图分类号：TQ425.6 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2012)03−0440−07 吸附、解离行为等[8]. 近年来，QCM 也被尝试用于原位 1 前 言 [9,10] [11,12] 表征酶在固液界面上的催化活性 . Hu 等 用 QCM 生物大分子在固相材料表面上的吸附和降解是自 对纤维素酶降解固定化在芯片表面上的纤维素进行了 然界的普遍现象. 而固体材料表面物理化学性质对蛋白 研究，获得了酶解过程中质量及耗散值变化，首次表征 质在其表面的附着、构象和活性、稳定性、降解性等均 了纤维素酶原位催化行为. 同其他分析方法如表面等离 会产生重要影响，因此也是洗涤去污、固定化酶、生物 子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)相比，QCM 分 催化、蛋白质组学等领域的重要研究内容，例如通过研 析技术具有信息量多、检测量程大等优势，更适用于界