双向电泳和质谱技术分析HCVNS3转化肝细胞的蛋白质组.pdfVIP

中南大学学报（医学版） 　２００７，３２（３） ＪＣｅｎｔＳｏｕｔｈＵｎｉｖ（ＭｅｄＳｃｉ） ３８７ ① 双向电泳和质谱技术分析ＨＣＶＮＳ３转化肝细胞的蛋白质组 １，２，３ ２，３ ４ １ 何琼琼 ，陈主初 ，肖旭贤 ，冯德云 ， ２ ２ １ ２ １ 肖志强 ，李　萃 ，李　波 ，张鹏飞 ，程瑞雪 （中南大学　１．基础医学院病理教研室；２．湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室； ３．肿瘤研究所；４．医学化学研究中心，长沙４１００７８） ［摘要］　 目的：持续感染丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）在肝细胞癌（ＨＣＣ）发生中起重要作用，细胞转染和 成瘤实验表明 ＨＣＶＮＳ３对人肝细胞具有转化作用和致瘤活性。本实验 旨在探讨 ＨＣＶ非结构蛋白３ （ＮＳ３）转化肝细胞的蛋白质组。方法：构建稳定表达 ＨＣＶＮＳ３Ｎ端多肽的人肝细胞（ｐＲｃＨＣＮＳ３／ＱＳＧ） 及空白质粒转染细胞（ｐＲｃＣＭＶ／ＱＳＧ），双向电泳技术分离两种细胞的总蛋白，差异蛋白质点进行质谱分 析，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹验证蛋白表达差异。结果：得到分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。ｐＲｃＨＣＮＳ３／ ＱＳＧ和 ｐＲｃＣＭＶ／ＱＳＧ细胞的蛋白质斑点数分别为（１１８３±７７）和（１０９５±８２）个，两组平均匹配数为 （９２０±６０）个。初步鉴定出１５个有意义的蛋白质点。其中Ｒａｓ，Ｐ３８，ＨＤ５３等参与调节信号转导的蛋 白在 ｐＲｃＨＣＮＳ３／ＱＳＧ细胞中表达上调，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果亦证实ｐＲｃＨＣＮＳ３／ＱＳＧ细胞中磷酸化的Ｐ４４／４２ 和 Ｐ３８表达增加。鉴定出的差异蛋白质还包括一些调节细胞周期、免疫反应、与肿瘤侵袭和转移相关 的蛋白质及参与肝脏代谢的蛋白质。结论：ＨＣＶＮＳ３可能通过影响多种蛋白表达，经相应信号转导途 径，如丝裂原活化蛋白激酶途径，使细胞发生恶性转化。进一步弄清信号转导过程和相互关系不仅对了 解 ＨＣＶ相关性 ＨＣＣ的发生机制有重要意义，而且为从分子水平治疗 ＨＣＣ提供新思路。 ［关键词］　 双向电泳；　质谱；　病毒非结构蛋白类；　细胞转化 ［中图分类号］　Ｑ８１１．４　　［文献标识码］　Ａ　　［文章编号］　１６７２７３４７（２００７）０３０３８７０９ ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｙＨＣＶＮＳ３ ｕｓｉｎｇｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎｄｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ １，２，３ ２，３ ４ １ ＨＥＱｉｏｎｇｑｉｏｎｇ ，ＣＨＥＮＺｈｕｃｈｕ ，ＸＩＡＯＸｕｘｉａｎ，ＦＥＮＧＤｅｙｕｎ ， ２ ２ １ ２ １ ＸＩＡＯＺｈｉｑｉａｎｇ，ＬＩＣｕｉ，ＬＩＢｏ，ＺＨＡＮＧＰｅｎｇｆｅｉ，ＣＨＥＮＧＲｕｉｘｕｅ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌ，；２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣａｎｃｅｒＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙｏｆ ＨｅａｌｔｈｏｆＣｈｉｎａ，ＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ；３．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ；４．ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＭｅｄｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ， ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈ