备与特异重结合性能研究.pdfVIP

蛋白质大分子印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球的制 备与特异重结合性能研究 杨春霞，赵孔银，英晓光，徐汝君，成国祥* 天津大学材料科学与工程学院, 天津 300072 * 联系人, E-mail: gxcheng@ 摘要 以海藻酸钙（SA）和聚乙烯基吡咯烷酮（PVP ）为原料，通过反相悬浮法 制备了牛血清白蛋白(BSA) 印迹的聚乙烯基吡咯烷酮/ 海藻酸钙聚合物微球 （PVP/CA ）。采用光学显微镜观察了印迹微球的形态，结果表明此种方法能制得 形态较好的微球。用紫外分光光度计分析微球的重结合行为，结果表明印迹微球 对目标蛋白质的特异重结合性比非印迹微球明显增加，优化的最高印迹效率值可 达 5.31 。此外还通过目标作用模式原理讨论了pH 值等因素对特异重结合性的 影响。 关键词 聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙；大分子印迹聚合物微球；牛血清白蛋白； 特异重结合性；目标作用模式原理 1. 前言 蛋白质等大分子印迹的困难与典型的小分子相比主要归因于大分子的空间 效应和结构的复杂多变性[1-5], 近年来人们越来越多地用水凝胶聚合物来进行 蛋白质印迹的研究, 但是水凝胶的一些传统制备方法具有一些限制如聚合反应 可能会引起蛋白质的变性等[7-16]，此外本体聚合得到的聚合物需要经过粉碎、 过筛等工艺, 大量的印迹聚合物被浪费掉[17-24]。近来张凤菊[11]等报道了蛋白 质印迹的海藻酸钙凝胶（CA ）微球，并进一步羟乙基纤维素用与海藻酸钠(SA) 形成互穿网络，在一定程度上提高了印迹效果。另外，赵孔银等以CaCl2 交联海 藻酸钠和磷酸氢二铵制备了大分子印迹的磷酸/海藻酸钙杂化聚合物微球，重结 合测试表明杂化聚合物微球比海藻酸钙微球表现出更高的重结合容量和印迹效 率[25]。 聚乙烯基吡咯烷酮（PVP ）是一种重要的水溶性合成聚合物，由其形成的水 凝胶具有性质可控易调等特点，本研究组曾采用VP 单体均聚和共聚等方法进行 蛋白质印迹微球的制备和重结合特性研究，获得了良好的效果[26-28]。本文报道 了由PVP 与CA 两种组分制备的聚合物微球，期望能获得优化效果。研究中通 过反相悬浮法制备PVP/CA 复合聚合物微球，采用紫外吸收等研究了微球的特异 重结合性能并进行了分析讨论。 2. 实验部分 2.1 原料和仪器 海藻酸钠(SA，Mw=218,000)(天津远航化学品有限公司); 牛血清白蛋白(BSA, Mw=66,000, pI=4.8) ( 中国医学科学院血液研究所) ；CaCl2 、聚乙烯基吡咯烷酮 （PVP K90 Mw 百灵威公司 ）、大豆油、醋酸丁酯、十六烷基三甲基 1 溴化铵(Tris) 、盐酸、乙基纤维素（EC ）(天津大学科威公司) 、十二烷基磺酸钠 （SDS ）、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯（Tween80 ）。紫外分光光度计(UV-1800， 日本日立公司); 光学显微镜(Axiovert 25C Carl Zeiss Co. Ltd. Germany) 。 2.2 印迹和非印迹PVP/CA聚合物微球的制备 1）取20ml 新配制的一定浓度和pH 值的BSA 溶液，加入一定质量的海藻酸钠， 搅拌使其充分溶解，静置消去气泡；得到BSA-海藻酸钠混合水溶液备用； 2 ）按2:1 的体积比量取大豆油和乙酸丁酯共计80ml，倒入250ml 的烧杯内，向 其中加入一定量的tween80 和乙基纤维素，常温搅拌10min 使其充分溶解；得到 有机油相备用； 3 ）将 BSA 、SA 混合水溶液在磁力搅拌下加入到盛有机油相的烧杯中，常温搅 拌10min 使粘稠的混合溶液分散成微球；在磁力搅拌下向体系中加入一定浓度的 CaCl2 溶液20ml 进行凝胶化反应，继续搅拌2 小时。 4