酶切过程中肽段过烷基化对蛋白质定性和定量分析的影响.pdfVIP

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2017-09-15 发布于重庆
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酶切过程中肽段过烷基化对蛋白质定性和定量分析的影响.pdf

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２０１３年１０月Ｖｏｌ.３１Ｎｏ.１０Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１３ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ９２７ ~９３３研究论文ＤＯＩ:１０.３７２４/ ＳＰ.Ｊ.１１２３.２０１３.０４０４１酶切过程中肽段过烷基化对蛋白质定性和定量分析的影响１ꎬ２１ꎬ２２２１１ꎬ２２∗ 王继峰 ꎬ　赵新元 ꎬ　赵　焱 ꎬ　马　成 ꎬ　钟儒刚 ꎬ　钱小红 ꎬ　应万涛 (１. 北京工业大学生命科学与生物工程学院ꎬ北京１０００２２ꎻ２. 蛋白质组学国家重点实验室ꎬ 北京蛋白质组研究中心ꎬ北京放射医学研究所ꎬ北京１０２２０６) 摘要:蛋白质的还原￣烷基化是蛋白质酶切中的重要步骤ꎬ常用的烷基化试剂是碘乙酰胺(ＩＡＡ)ꎬ但是ＩＡＡ除了和半胱氨酸发生反应ꎬ也可能和其他多种氨基酸发生副反应ꎮ 我们模拟常规的酶切条件ꎬ系统地研究了蛋白质真实酶切时所有酶切肽段发生烷基化的情况ꎮ 结果表明ꎬ多种氨基酸可以发生烷基化ꎬ其趋势为:半胱氨酸肽段Ｎ端氨基酸天冬氨酸谷氨酸组氨酸天冬酰胺赖氨酸酪氨酸ꎬ同时也发现同一肽段上的氨基酸烷基化具有排他性和聚集性ꎮ 根据定性结果ꎬ采用质谱多反应监测(ＭＲＭ)技术对多个肽段进行了定量分析ꎬ评估了过烷基化对蛋白质定量分析的影响ꎮ 该研究结果表明ꎬ过量的烷基化修饰对蛋白质的定性与定量分析都可能产生较大影响ꎮ 在蛋白质组学研究的样本处理流程中ꎬ应避免样本的过烷基化ꎮ 关键词:液相色谱ꎻ质谱ꎻ多反应监测ꎻ蛋白质组学ꎻ烷基化ꎻ碘乙酰胺中图分类号:Ｏ６５８　　　文献标识码:Ａ　　　文章编号:１０００￣８７１３(２０１３)１０￣０９２７￣０７Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｏｖｅｒａｌｋｙｌａｔｉｏｎｉｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｎｔｈｅｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓ１ꎬ２１ꎬ２２２ＷＡＮＧＪｉｆｅｎｇ ꎬＺＨＡＯＸｉｎｙｕａｎ ꎬＺＨＡＯＹａｎ ꎬＭＡＣｈｅｎｇ ꎬ １１ꎬ２２∗ ＺＨＯＮＧＲｕｇａｎｇ ꎬＱＩＡＮＸｉａｏｈｏｎｇ ꎬＹＩＮＧＷａｎｔａｏ (１. ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏ￣ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＢｅｉｊｉｎｇ１０００２２ꎬＣｈｉｎａꎻ ２. ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓꎬＢｅｉｊｉｎｇＰｒｏｔｅｏｍｅＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒꎬ ＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＢｅｉｊｉｎｇ１０２２０６ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎａｎｄａｌｋｙｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｏｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅ (ＩＡＡ) ｏｆｔｈｅｄｉｓｕｌｆｉｄｅｂｒｉｄｇｅｓｉｎｐｒｏ￣ｔｅｉｎｓａｒｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓｕｓｅｄｉｎｐｒｏｔｅｉｎｄｉｇｅｓｔｉｏｎ. Ｂｕｔｔ