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生物秀实验频道——生命科学实验中心 /bio101 描式探针显微镜于生物样本的量测与应用 描式探针显微镜于生物样本的量测与应用 吴靖宙 现为国立成功大学医学工程研究所博士候选人 * 张宪彰 日本国立东北大学化工博士，现为国立成功大学医学工程研究所教授 摘要 显微镜的发明有助于人们对微小物体结构的观察，传统上常用来观察生物样本分子级或 细胞级结构的方法，大都采用电子显微镜法。在处理适合电子显微镜观测的样本时，需经固 定、切片、脱 、镀金等等步骤，但一般生物样本在正常生理状况下是富含水份的，若经这 些步骤，将会使生物样本原本的形状、尺寸或结构产生变化，而所量得的影像将不再是生物 样本真正的形态。扫描式探针显微镜(scanning probe microscope, SPM)具有高解析率与在液 相操作能力，使生物样本在正常生理环境下不需经前处理也能被观测，此优点使 SPM 逐渐 被应用在生物样本的量测上。特别是在此政府大力推行各项的奈米计划(主要分奈米电子、奈 米材料、奈米生物、奈米检测与设备开发 4 大主题)之际，SPM 其简便性与原子级解析力实 为观测奈米结构的利器，将在奈米生物领域之研究中独领风骚。本文将对SPM 的基本原理、 常用在生物样本量测的功能与目前实际在生物样本之表面微观或微小特定部位力学相关之量 测时的应用，做一概述。 一、 绪论 可藉以描述表面微结构之量测仪器的发展，关系到人类对生物样本的认识程度，早在17 世纪虎克发明了第一台的光学显微镜(optical microscope)，观察到植物细胞的构造，并经过 长久的光学发展，可以将生物样本的结构看得更清楚。其后再藉助计算机与压电扫描仪制作 技术的进步，更有共轭焦显微镜(confocal microscope)的发明，大大提升了光学显微镜在Ｚ轴 上的分辨率，且配合荧光染色技术可对细胞膜上或胞内的分子做定性与定量上的量测，但其 分辨率仍受到Abbe 障碍(Ernst Abbe, 1840~1905, 分辨率为观测光源波长之半) 的限制只能达 到0.2 m。此光学的极限在1934 年Emst Ruska 发明了以电子束为光源的电子显微镜才得以 解决，并得以撷取许多极微观世界的资料与分子结构的观察。但这种必须以一次电子穿透(穿 透式电子显微镜，TEM)或二次电子反射(扫描式电子显微镜，SEM)的显微技术，则须透过将 试样干 后镀金甚至切片的前处理后，置于真空中才能观测，显然这样的试片制备程序在在 会破坏生物样本的原有结构，而无法得到生物样本在含水状态下的真实特性。 到了1980 年初期， 描式穿隧电流显微镜 (scanning tunneling microscopy, STM)的发 明则将显微镜的分辨率提高到原子等级，其后更有利用原子间作用力呈像的原子力显微镜 (atomic force microscope, AFM)被发明，由于AFM 具有可在液相、气相中操作且样本不需复 杂前处理的特性，被广泛的应用在生物样本型态学的研究，且其力学量测的功能更被视为量 测软组织或分子间机械特性的利器。近年更有多种利用不同原理开发出来藉以评估样本表面 电性与磁性分布的显微镜问世，这些利用探针 描样本表面的显微镜都统称为扫描式探针显 微镜(scanning probe microscopy, SPM) 。 1 列出四种主要显微镜对表面量测的特性比较。 1. 四种主要显微镜对表面量测的特性比较。 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs 生物秀实验频道——生命科学实验中心 /bio101 Resolution Resolution Circumstance Pretreatment Magnification X, Y Z required 3 Optical 0.2 m 1 m air, liquid no