聚乙二醇对ELPI相变温度的影响.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（５）：８１８５ 聚乙二醇对ＥＬＰ［Ｉ］ 相变温度的影响 ４０ １，２ ２ ２ ２ ２ ２ 林　衡 　李军明 　葛高顺 　张立超 　孙利慧 　胡学军 （１大连大学生命科学与技术学院　大连　１１６６２２　２大连大学医学院　大连　１１６６２２） 摘要　目的：研究聚乙二醇（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ，ＰＥＧ）对类弹性蛋白（ｅｌａｓｔｉｎｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＥＬＰ） ＥＬＰ［Ｉ］相变温度（ｉｎｖｅｒｓｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，Ｔ）的影响。方法：设计并合成 ＥＬＰ［Ｉ］基因 ４０ ｔ ４０ （由４０个（ＶＰＧＩＧ）五肽单元串联组成），表达纯化后，检测不同浓度ＰＥＧ条件下ＥＬＰ［Ｉ］的Ｔ。 ４０ ｔ 结果：在ＥＬＰ［Ｉ］终浓度为２５ ｍｏｌ／Ｌ时，ＰＥＧ浓度为５％，１０％，１５％，２０％，２５％时分别使 Ｔ由 ４０ μ ｔ ２９℃降至２６．５℃，２２℃，１５．２℃，８．８℃，２．５℃。结论：ＰＥＧ可降低 ＥＬＰ的Ｔ，可通过 ＰＥＧ促进 ｔ ＥＬＰ重组蛋白分离纯化。 关键词　聚乙二醇　类弹性蛋白标签　相变温度　分离纯化 中图分类号　Ｑ５１ 　　ＥＬＰ是人工合成的温敏型多肽聚合物，主要由五 用ＰＥＧ促进重组蛋白分离纯化提供理论依据，为科学 肽重复序列单元 ＶａｌＰｒｏＧｌｙＸａａＧｌｙ串连重复组成 利用ＰＥＧ促进ＥＬＰ融合蛋白分离纯化奠定基础。 （Ｘａａ称为“客座氨基酸”，可以是除Ｐｒｏ以外的任意一 ［１３］ １　材料与方法 种氨基酸）。ＥＬＰ具有可逆的相变特性 ，ＥＬＰ融合 ［４］ １．１　材　料 蛋白仍然具有这种特性 。利用这一特性，ＥＬＰ应用 ［２］ 于重组蛋白纯化 。通过 ＩＴＣ循环处理，经离心就可 １．１．１　菌株、载体及基因　大肠杆菌 ＪＭ１０９购自 以达到简单、快速纯化ＥＬＰ和ＥＬＰ融合蛋白的目的。 ＴａＫａＲａ公司；大肠杆菌 ＢＬＲ（ＤＥ３）、表达载体 ｐＥＴ２８ 　　为提高分离纯化效率，通常通过添加盐离子，降低 （＋）购自Ｎｏｖａｇｅｎ公司；克隆载体 ｐＡＫ４００ＬＨ由本实 Ｔ促进ＥＬＰ的分离纯化。不同种类盐离子对 ＥＬＰ的 验室保存；ＥＬＰ［Ｉ］基因由本实验室设计合成。 ｔ ４０ ［５］ １．１．２　酶和试剂　限制性内切酶Ｘｂａ 、ＢａｍＨ 、Ｂｇｌ Ｔ影响遵循霍夫迈斯特离子序 （ｈｏｆｍｅｉｓｔｅｒｓｅｒｉｅｓ），即 Ⅰ Ⅰ ｔ ２－ ２－ － － － 、Ｎｃｏ 、Ｘｈｏ 、碱性磷酸酶（ＢＡＰ）、Ｔ４ＤＮＡ连接酶、 阴离子ＳＯ ＞ＨＰＯ ＞ＣＨ３ＣＯＯ ＞Ｃｌ＞Ｂｒ ＞ Ⅰ Ⅰ Ⅰ