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细胞毒性分析 新的药物、化妆品、食品添加剂等在投入使用之前，都必须进行大量的细胞毒性试验。如果是 抗癌药物，细胞毒性就是它们作用的关键所在；而其他药物或化妆品等，则恰恰需要证明它们是没 有毒性的。因此对于细胞毒性的研究也随研究目的的不同而不同。对于抗癌药物可能旨在将细胞杀 死，而要证明其他化合物没有毒性则需要更精确的研究，如监控细胞代谢水平的变化或信号通路的 改变。 目前分析细胞毒性和细胞活性的方法有 另一种检测细胞膜完整性的方法就是检 很多种，而且渐渐显露出这样的趋势，就是远 测从胞浆释放到培养基中的成分。大家比较熟 离同位素，方法越来越简单，适用于高通量自 悉的有51Cr 释放法。不过不需要使用同位素 动化分析。例如大家熟悉的51Cr 释放实验， 的乳酸脱氢酶（LDH ）活性释放分析则成为 是分析细胞介导的细胞毒性的经典方法，但由 它的极佳替代。LDH 在胞浆内含量丰富，正 于需要使用同位素，不安全，研究人员于是不 常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时 断开发出新的替代方法。目前常用的细胞毒性 可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH 活 方法则有台盼蓝染料排斥法、LDH 法、MTT 性与细胞死亡数目成正比，用比色法测定并与 法、alamarBlue 等等。下面就给大家一一介 靶细胞对照孔LDH 活性比较，可计算效应细 绍。 胞对靶细胞的杀伤效果。此方法不需要预先标 记，操作简便快捷，自然释放率低，可用于细 有多少细胞死了 胞毒性T 淋巴细胞及NK 细胞活性测定，以及 经典的评估细胞死亡的方法是定量细胞 药物、化学物质或放射引起的细胞毒性。配合 膜的损伤。常见的台盼蓝染料排斥法就是基于 96 孔板或384 孔板，可用于高通量检测。不 细胞膜通透性的改变。台盼蓝这种染料在正常 过应注意较高浓度血清中所含的LDH 可能会 情况下不能透过细胞膜，进入细胞。当细胞死 干扰结果，应使用只含有培养基和血清而不含 亡(失去活力）时，其细胞膜因破损而被台盼 细胞的孔作为对照。丙酮酸盐是LDH 反应的 蓝染料透过。通过对未着色细胞的计数，就可 抑制剂，应避免细胞培养基中含有该成分。市 以估算出细胞活力。市场上的一些细胞活力分 场上畅销的产品有 Roche 的 Cytotoxicity 析仪如 GE 的Cytorecon 和贝克曼库尔特的 Detection Kit PLUS (LDH), 和promega 的 Vi-CELL 系列，也是用这种方法来测定细胞活 CytoTox 96 （比色法）、CytoTox-ONE （荧 力。不过染色时间要控制在1-2 分钟，不宜过 光法）等。 长，否则活细胞会受到损伤而吸收染料，影响 有多少细胞还活着 实验结果。这种方法简单快速，价格低廉，准 确性还行，不过用于高通量分析就太累了（除 MTT 法是目前应用最广泛的细胞活性测 非你用仪器）。类似的染料还有PI。 定方法。MTT 是一种黄色水溶性四唑染料， 第 1 页，共 21 页 下一页 返 回 它可以被活细胞还原成紫色的不溶于水的甲