无水体系中环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶制备高载量固定化金属.pdfVIP

第 10卷第5 期 过 程 工 程 学 报 Vol.10 No.5 2010 年 1 0 月 The Chinese Journal of Process Engineering Oct. 2010 无水体系中环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶制备 高载量固定化金属亲和层析介质 张松平， 丁 锐， 苏志国， 王 平 ( 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190) 摘 要：在以二甲基亚砜为溶剂的无水体系中，利用环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶 Sepharose 6 Fast Flow 进行活化，并偶 联亚氨基二乙酸和 Cu2+制备了固定化金属亲和层析介质. 结果表明，该体系中环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶的活化效率大 幅度提高，在 40%(ϕ)环氧氯丙烷、0.02 g/mL NaOH 及 50 ℃、反应时间4 h 的优化条件下，环氧基活化密度最高达 165 µmol/mL ，较目前报道的最高值提高 50% 以上. 最终所制介质的 Cu2+螯合密度为 128.3 µmol/mL ，对BSA 的平衡吸附 容量达 2.05 mmol/L. 以0.5 mol/L 咪唑为洗脱剂，被吸附的 BSA 洗脱率可达 90% 以上. 关键词：固定化金属亲和层析；琼脂糖凝胶；环氧氯丙烷；活化 中图分类号：TQ425.6 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2010)05−0971−05 1 前 言 提高到了 100 µmol/mL 左右，但反应介质为水，水解反 随着生物技术的发展，固定化金属亲和层析 应仍较严重. 如果完全以 DMSO 替代水，在无水体系中 (Immobilized Metal Affinity Chromatography, IMAC)技 对琼脂糖进行活化，则有望进一步提高活化效率，进而 [1] [2] 获得高配基密度和对蛋白质具有高载量的 IMAC 介质. 术在蛋白质的分离纯化 、质粒DNA 提取 、蛋白质组 [3] [4] 本工作考察了环氧氯丙烷在 DMSO 中对琼脂糖凝 学研究 和蛋白质复性 等领域发挥着越来越重要的作 用. 载体活化和亲和配基偶联是制备 IMAC 介质的最关 胶 Sepharose 6FF 进行活化的反应条件，结果表明通过 键步骤. 利用环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶进行活化后偶联 条件优化环氧基密度可达 163 µmol/mL. 以IDA 为螯合 上可与金属离子形成配位键的螯合剂，如亚氨基二乙酸 剂制备出了高金属离子密度的 Cu2+−Sepharose 6FF (Iminodiacetic Acid，IDA) 、次氨基三乙酸(Nitrilotriacetic IMAC 介质，该介质对蛋白质具有高的吸附容量. Acid ，NTA) ，是制备IMAC 介质的主要方法. 但目前商 2 材料与方法 业化 IMAC 介质的金属离子密度普遍较低，如 GE Healthcare 公 司 的 IMAC Sepharose 6 Fast Flow 2.1 材料和仪器 (Sepharose 6FF)是应用最广泛的金属亲和介质，Cu2+ 的 琼脂糖凝胶 Sepharose 6FF 购自瑞典 GE Healthcare 螯合密度仅为 32 µmol/mL ，从而导致对蛋白质的吸附容 公司，牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)购自 量仅有约 25 mg/mL(与蛋白种类有关)[5]. 为制备出对蛋 美国 Sigma 公司，其他试剂包括二甲基亚砜(Dimethyl 白质具有更