紫外可见分光光度法在核酸分析中的应用.pdfVIP

紫外-可见分光光度法在核酸分析中的应用 学生： 吕震 指导教师： 罗川南 夏方诠 摘要 综述紫外-可见分光光度法测定核酸总量的方法，总结紫外-可见分光光度 法研究核酸与小分子之间的相互作用机理。 关键词 核酸 紫外可见分光光度法 小分子 1. 引言 核酸是遗传信息的载体，在生物的生长、发育及繁殖等生命过程中起着十分 重要的作用。它是以核苷酸为基本组成的生物信息大分子。天然存在的核酸可以 分为脱氧核糖核酸 (DNA) 和核糖核酸 (RNA) 两大类。1953 年watson和crick[1] 提出DNA 的双螺旋结构模型，从分子水平上阐述了生命遗传信息通过DNA 的半 保留复制进行代代遗传的机理，从此生物学进入了分子生物学的新时代。 核酸在酶的催化作用下水解为核苷酸。核苷酸完全水解可释放出等量的含氮 碱基、戊糖和磷酸。构成核苷酸的五种碱基分别为腺嘌呤(adenine, A ），鸟嘌呤 (guanine, G ），胞嘧啶(cytosine, C ），胸腺嘧啶(thymine, T ）和尿嘧啶(uracil, U) 。 其中，腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶存在于DNA和RNA分子中，胸腺嘧啶仅存在于 DNA分子中，尿嘧啶仅存在于RNA分子中。DNA存在于细胞核和线粒体内，携 带遗传基因，决定着细胞和个体的遗传性；RNA存在于细胞质、细胞核和线粒 体中，参与遗传信息的复制和表达[2] 。因此，它在生命科学的研究中有着无与伦 比的重要，其测定具有重要意义。 核酸是遗传信息的载体，是基因表达的物质基础。核酸在生物的生长、发育 及繁殖等生命过程中起着十分重要的作用。许多药物小分子能与核酸发生相互作 用，破坏其模板作用，使核酸链断裂，进而影响基因调控和表达功能[3] 。从生物 学角度来看，DNA 的化学环境就是指DNA周围存在的小分子化合物，研究这些 小分子物质与DNA 的相互作用，对于认识小分子物质的活性及药物、污染物或 毒物在生物体内的作用机理有着极其重要的意义。早在 60 年代，意大利、法国、 日本及美国的一些实验室就开展了有关DNA 。蒽环抗生素道诺霉素(daunomycin， DMN)加合物的研究，发现蒽环化合物通过其带正电荷的糖残基与DNA之间的静 电作用及蒽环平面与DNA 的嵌入结合而形成加合物。道诺霉素的抗癌作用，与 其能够和DNA形成加合物也是密切相关的。分子生物学和分子药理学的发展使 人们能够从基因水平上理解某些疾病的发病机理，并通过分子设计来寻找有效的 治疗药物。DNA靶向化合物成为很重要的药物选择对象。虽然DNA靶向化合物 的数量非常之大，但与DNA 的结合方式归纳起来可分为非共价结合、共价结合 和剪切作用[4,5]三类。 (1). 非共价作用(可逆相互作用) 。这种作用方式受到介质的酸度、离子强度、 小分子与DNA 的摩尔比等条件的影响，当条件发生改变时，两者作用形式也随 之改变，称为可逆的相互作用。A. 静电作用。核酸的电负性磷酸根骨架可同阳 离子发生静电作用，导致小分子在DNA表面堆积，这种作用是无选择性的。B. 沟 槽结合模式。DNA双链结构中大沟宽度为 1.2nm，小沟宽度为 0.6nm，故一些小 分子能与DNA大沟或小沟的碱基对边缘直接发生作用。由于大、小沟模区在电 势能、氢键特征、立体效应、水合作用上有很大不同，故大分子蛋白质常与DNA 的大槽沟结合，而大多数小分子则与小槽沟结合，小分子往往通过腺嘌呤碱基 N-3 上的氮或胸腺嘧啶碱基C-2 上的碳基氧形成氢键而与碱基对结合[6] 。C. 嵌插 结合模式。这种结合模式是指具有平面或几乎平面结构的芳香环嵌入DNA碱基 对之间，它的作用力来自芳环的离域Π体系之间的Π- Π相互作用以及疏水相互 作用。它是药物小分子与DNA发生作用的重要形式之一。当小分子嵌入碱基对 之后，可直接抑制DNA复制与转录。 (2). 共价作用(不可逆相互作用)及剪切作用。共价结合是指小分子化合物与 分子中的原子通过形成共价键而结合的相互作用方式。当小分子与 DNA 结合形 成共价键后，经过一系列化学反应，最终导致 DNA 断裂，这种