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湖南长郡卫星远程学校 2012年上学期 制作 03 1.生物体的遗传物质是什么? 讨论 2.真核生物的遗传物质存在于哪里? 1.生物体的遗传物质是什么? 讨论 2.真核生物的遗传物质存在于哪里? 1.生物体的遗传物质是什么? 3.怎样才能将真核细胞内的遗传物质 分离来? 讨论 DNA的粗提取与鉴定 用什么材料提取DNA?为什么? (一)实验材料的选取: (一)实验材料的选取: 鸡血细胞做实验材料。原因: 1. 鸡血细胞核DNA含量丰富,材料易得 2. 鸡血细胞极易吸水胀破 3. 植物细胞外有细胞壁,其他动物细胞制取DNA有时需匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长。 (二)破碎细胞,获取含DNA的滤液 1. 若是动物细胞,如何获取DNA滤液? 2. 若是植物细胞,如何获取DNA滤液? (二)破碎细胞,获取含DNA的滤液 1. 若是动物细胞,如何获取DNA滤液? 加入洗涤剂和食盐的作用分别是? 如果研磨不充分,会对实验结果产生什么影响? 加入洗涤剂和食盐的作用分别是? 如果研磨不充分,会对实验结果产生什么影响? 洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA释放;食盐有利于DNA溶解 加入洗涤剂和食盐的作用分别是? 如果研磨不充分,会对实验结果产生什么影响? 洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA释放;食盐有利于DNA溶解 会使细胞核内DNA释放不完全,提取DNA量变少,影响实验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分? (三)去除滤液中的杂质 可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 (三)去除滤液中的杂质 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分? 根据DNA的理化性质,可以用哪些方法来去除滤液中的杂质? (三)去除滤液中的杂质 为什么反复地溶解与析出DNA,能够除去杂质?(注意:两种食盐溶液的浓度和作用) (三)去除滤液中的杂质 (三)去除滤液中的杂质 为什么反复地溶解与析出DNA,能够除去杂质?(注意:两种食盐溶液的浓度和作用) 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出,能除去在低盐溶液中的杂质。因此,反复溶解与析出DNA,就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 析出: 滤液+同体积95%冷却酒精 白色丝状物 (四)DNA的析出 (五)DNA的鉴定 如何鉴定?对比反应是为了证明什么?原理? DNA+二苯胺 蓝色物 沸水浴 (五)DNA的鉴定 如何鉴定?对比反应是为了证明什么?原理? 三、操作提示 1. 以血液为实验材料,每100ml 加入3g柠檬酸钠,作为抗凝剂。 2. 加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 三、操作提示 1. 以血液为实验材料,每100ml 加入3g柠檬酸钠,作为抗凝剂。 2. 加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3. 二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果。 三、操作提示 1. 以血液为实验材料,每100ml 加入3g柠檬酸钠,作为抗凝剂。 试 验 ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得 DNA最大限度地析出 ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得 DNA最大限度地析出 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得 DNA最大限度地析出 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质
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