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题 专 用 应 子 分 大 应用指南 28-9870-45 AA MicroCalTM 非标记相互作用分析 采用微量热差示扫描量热技术对治疗性抗体的工艺开发 进行更有效的指导 测定pH值和离子浓度对蛋白质稳定性的影响，对于开 IgE对于宿主预防寄生虫和防御性炎症来说是很重要的。 发的可靠的蛋白质提纯步骤和制剂配方策略来说具有重 然而IgE通过其受体转导信号也是过敏性炎症的一个焦点 要的意义。毛细管微量热差示扫描量热法（毛细管DSC） （4 ）。IgE的恒定区是一个包含三个 独特Ig折叠区域 非常适合于提供此类信息，在开发治疗性蛋白质方面具 （Cε2、Cε3 、Cε4 ）重复对的同型二聚体，负责绑定其 有特别的实用价值。在此讲述的是对用作药物的两种抗 两个受体即FcεRI和CD23 （又称FcεRII），见图1。 体形式（IgG1和IgE）的pH值/离子浓度稳定性的信息采 用用微量热差示扫描量热法（DSC）所做的研究。微量 本应用指南主要关注微量热差示扫描量热法（DSC）的 热差示扫描量热法（DSC）擅长考察、研究与多结构域 实用性，用以多方面指导IgG和IgE的生物制剂开发过程。 蛋白质中不同的单结构域的稳定性，例如抗体。在此可 尤其是差示扫描量热法（DSC）对于运输、纯化和配制 以看到，IgE恒定的结构域片段（Fc）对低酸碱度/高盐 IgG及制剂药品提供了颇有见地的指导。圆二色光谱 分的环境比IgG1 Fc更为敏感。这些结果表明，用于IgG （CD ）对于此类研究发现的贡献与微量热采用差示扫 抗体的纯化和制剂策略不适用于IgE的纯化和制剂。该应 描量热法（DSC）所能达到的鉴别水平上的比较：微量 用指南显示了微量热差示扫描量热法（DSC）是如何用 热差示扫描量热法（DSC）能够在多结构域蛋白质内的 于指导抗体及其他治疗用蛋白质的开发研究的。 单结构域水平上研究蛋白质的稳定性，而这方面圆二色 谱获得的数据透明度较低。 导言 γ同种型免疫球蛋白——特别是人源IgG1——的生产和 纯化，对于诊断或治疗的应用来说目前已经常规化了。 另一方面，基于IgE的疗法最近才刚刚开始兴起（1-3）， 尚未确定大规模生产、处理和配制IgE或IgE恒定区（Fcε） 的标准方法。虽然对于IgE的生物化学和免疫调节功能 已有较多掌握，但仍未弄清Fcε在耐热性或pH敏感度 （2）方面是否与Fcγ相似，也未弄清处理IgG的标准方法 是否适用于IgE。 图1. IgG和IgE的示意图。 材料与方法 TM 题 专 用 应 子 分 大 微量热差示扫描量热法（DSC）试验是在MicroCal VP -Cap DSC系统上进行的。提纯的Fcε、Fcγ和Fcγ- Cε2 蛋白质的产生过程如前所述（5）。全套的毛细管DSC试 验以不同的酸碱度扫描超过400次，但在四个多月的时 间内投入人力很少。只需大约三个工时便可准备好Fcε和 Fcγ的试验，包括蛋白质浓度测量、稀释和平板的装调。 试验的其余步骤就由MicroCalTM VP-Cap DSC自动完成了。 详尽的说明见（5）。 结果