应用荧光原位杂交技术检测大麻哈鱼生长激素基因在超级鲤染色体上的插入位点.pdfVIP

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2017-09-15 发布于安徽
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应用荧光原位杂交技术检测大麻哈鱼生长激素基因在超级鲤染色体上的插入位点.pdf

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业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13 (1): 127~ 128 ·研究简报· 应用荧光原位杂交技术检测大麻哈鱼生长激素基因在超级鲤染色体上的插入位点* 波梁利群** 孙效文曹鼎臣闫学春（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，哈尔滨150070 ）关键词：荧光原位杂交; 染色体; 生长激素基因; 着丝粒 Detection of the Inserted Site of Growth Hormone Gene of in Super-carp Chromosomes by FISH GENG Bo LIANG Li-Qun SUN Xiao-Wen CAO Ding-Chen YAN Xue-Chun （） fluorescent hybridization(FISH); chromosome; growth hormone gene; centromere 对外源基因在鱼体内的整合、表达及遗传 (夏德全等， Upper primer ：5-cy5-TCAAGGGCACATCAACAG-3 ； 2000)情况并不清楚。直接荧光原位杂交方法已在医学、林 Lower primer ：5-GGCGGAAAGAGATATGGA-3。，，牧渔（权法霞等 1999 ；孙梅和刘红林 2000 ）等各方面得到 1.3 荧光探针的制备广泛的应用。本实验采用直接荧光原位杂交的方法，将荧光采用PCR 扩增的方法从本室构建的大麻哈鱼生长激素通过素分子(cy5)直接标记在上游引物5 末端， PCR 扩增获基因全长质粒（sGH ）中调取相应的约 1 kb 大小的荧光探得标记的探针,将探针与变性的染色体玻片进行杂交，经一系，方法如下，PCR 反应体系(25 L) ：DNA 1 L ，PCR buffer 列洗涤和复染过程, 在荧光显微镜下观察大麻哈鱼生长激素 (含适量dNTP) 18 L ， DNA polymerase 1 L (5 U/ L) ，基因在鲤鱼染色体上的插入位点。引物各 1 L(0.1 g/ L) ，ddH O 4 L。反应条件：94 ℃ min ， 2 94 ℃ min ，55 ℃ 1 min ，72 ℃ min ，72 ℃ 5 min ，40 循环。扩增 1 材料和方法后的PCR 产物通过低熔点琼脂糖凝胶电泳和液氮反复冻融 1.1 材料及设备