磷脂酶A1催化水解大豆油法制备甘油二酯及其固定化研究.pdfVIP

摘 要 本文利用磷脂酶A1催化水解大豆油的方法，对水解后的产物采用两步分子蒸馏法来制 备富含甘油二酯的功能性油脂。并对磷脂酶A1 的固定化作了初步探讨。 该酶催化的最适pH值为6.8，在pH 4~8之间具有良好的稳定性；最适温度40℃，在低 于45 ℃时具有良好的稳定性；当用0.1% 的氯化钙水溶液作为水解反应物时，和蒸馏水相比， 钙离子对于维持磷脂酶A1多次循环利用的残余活力有促进作用。水解反应残余活力的磷脂 酶A1再加上50%的新添加酶，表现出很强的催化水解活力，酶回收使用6次时，残余酶活 力仍然有初次使用活力的86.88%。 用分子蒸馏和柱层析的方法制备了大豆油甘油二酯（DAG ）的标准样品，通过高效液 相- 电喷雾质谱联用（HPLC-ESI-MS ）和薄层色谱法（TLC ）验证了标准样品的纯度。用反 相高效液相色谱（RP-HPLC ）在 UV=210 nm 做了大豆油 DAG 的标准曲线，在浓度范围 1.0～12.0 mg/mL, 大豆油 DAG 标准曲线线性良好。通过加样回收试验表明，加样回收率 在 104～109%之间，RSD 在 0.69～5.19%之间。并用该方法分析了大豆油、分子蒸馏 DAG 样品中的 DAG 含量。 采用明胶包埋、戊二醛交联双重固定法固定磷脂酶 A1 后，固定化酶的稳定催化水解 效率为等量液态酶催化水解效率的 30%左右；采用硅藻土吸附法来固定磷脂酶 A1 ，固定 化酶的稳定催化水解效率仅为等量液态酶水解效率的 33%左右；通过对六种型号大孔吸附 树脂的吸附能力进行筛选后，选取 D113 型的树脂作为后续深入研究固定化酶的载体材料。 关键词：磷脂酶 A1 ；大豆油；甘油二酯；分子蒸馏；固定化 I Abstract The purpose of this study was to prepare diacylglycerol (DAG) rich functional oil from soybean oil catalyzed with phospholipase A1 (PLA1), and concentrated and purified by two-step molecular distillation, and to immobilize the catalysis enzyme. The optimal pH value and temperature for hydrolysis of soybean by PLA1 was 6.8 and 40 ℃, respectively. PLA1 showed good stability at pH range of 4 to 8 and temperature below 45 ℃. Using 0.1% of calcium chloride solution as the reactant at the circulated reactions, the residual activity of the enzyme was improved by calcium ion. The mixture of recycled enzyme and 50% of fresh PLA1 showed high hydrolysis activity. After used for six batches, the residual enzyme activity reached 86.88%. Soybean DAG standard was prepared by combination of molecular distillation and column chromatography. The purity of the standard was verified by high performance liquid chromatography / electrospray ionization/mass spectrometry (HPLC-ESI-MS) and