磷脂酶A1催化脂肪酸酯化法合成甘油二酯的研究.pdfVIP

摘 要 甘油二酯 （DAG ）是一种重要的功能性油脂，具有抑制肥胖，降低餐后血糖等功能。 本文以大豆油脂肪酸 （FFA ）和甘油 （Gly ）为原料，经磷脂酶A1 （Lecitase Ultra ）催化酯 化反应制备DAG 。建立了高温气相色谱分析油脂样品中FFA和甘油酯的方法，并通过一次 分子蒸馏纯化粗DAG ，得到了高纯的DAG产品。 利用单因素和响应面实验优化反应条件。研究反应时间 （2-10 h），加水量 （2-14 wt-% 底物质量），加酶量 （10-120 U/g底物质量），反应温度 （30-70 ℃）和底物摩尔比Gly : FFA （0.5-2.5 ）对酯化率的影响。得出最佳反应条件为：反应温度40 ℃，加水量8 wt-%，反应 时间8 h ，底物摩尔比（Gly : FFA ）2.2:1，加酶量90 U/g 。在此反应条件下，脂肪酸酯化率 为81.12%，DAG 的含量为37.62% 。 建立了高温气相色谱分析油脂样品中FFA和甘油酯的方法，经过优化，甘油酯总分析 时间缩短到10 min以内。保留时间定性，外标法定量，定性定量准确。得到FFA 、单甘酯 (MAG)、DAG 、TAG 的气相色谱分析的标准曲线，在质量浓度范围0.5～20.0 mg/mL 内峰面 积与被测物浓度线性关系良好。通过加样回收试验表明，平均加样回收率在95.69～105.78% 之间，RSD在0.27～2. 98%之间。 酯化反应混合液经过静置分层，得到含有DAG 的油层。采用分子蒸馏法除去油层中未 反应的FFA和副产物MAG ，170℃蒸馏柱温下得到DAG产品，纯度为83.1%，得率为42.7% 。 同时测定了分子蒸馏重相和轻相中DAG 的含量及脂肪酸组成。 关键词：甘油二酯；磷脂酶A1 ；酯化反应；高温气相色谱；分子蒸馏 I Abstract Diacylglycerol (DAG) is an important ingredient of the functional edible oils which shows benifits of antiobesity and lowering the postprandial blood sugar. Production of diacylglycerol by esterification of free fatty acid (FFA) with glycerol (Gly) catalyzed by phospholipase A1 (Lecitase Ultra) was investigated in this work, and a high temperature gas chromatography method was developed for analyzing FFA and mono-(MAG), di-(DAG) and triglycerides (TAG) obtained by the soybean oils. The crude diacylglycerol from the optimal conditions was molecularly distilled. The conditions including reaction time (2-10 h), water content (2-14 wt-%, FFA and Gly mass), enzyme load (10-120 U/g, FFA and Gly mass), reaction temperature (30-70 ℃) and mole ratio of Gly to FFA (0.5-2.5) were studied using single-factor experiment and response surface methodology (RSM). The optimal conditions were obta