免疫组织化学技术常见问题分析及策略.pdfVIP

免疫组织化学技术常见问题分析及对策 ! ! 郑 晖 罗洪英 颜亚晖 ! （中南大学基础医学院病理学系，长沙 #!$$% ；长沙民政职业技术学院康复医学系，长沙 #!$$$’ ） 〔摘要〕 免疫组织化学染色是目前常规病理诊断及鉴别诊断的重要方法和手段，但在制作免疫组织化学切片中存在 着影响结果的许多因素，本文较全面地阐述了影响制片质量的常见因素，并对出现的问题进行了分析和提出了切实可行的 对策。 〔关键词〕 免疫组织化学； 对策 〔中图分类号〕 ()*+)) 〔文献标识码〕 , 在临床病理诊断和形态学研究中，免疫组织化 再烤片，使组织粘贴牢固。 学染色是一种很重要的技术和手段，免疫组化切片 -? 假阴性 的质量直接影响着诊断结果的判断。因此制作良好 免疫组织化学染色切片中无阳性信号，有两种 的免疫组化切片至关重要。由于免疫组织化学切片 可能，一种是组织或细胞确实不表达待检抗原，即 制作过程存在很多步骤和环节，每一个步骤和环节 真阴性结果；另一种为假阴性。导致假阴性结果的 都可能影响最终检测结果［!］，故制作一张高质量 原因有：组织未进行抗原修复或修复方法不当， 的免疫组织化学切片并不是一件容易的事，我们根 不同的组织其抗原修复方法不同，选择适当的修复 据多年的实践经验，针对免疫组织化学制片过程中 方法：热修复或酶消化。 一抗效价降低或失效， # 出现的常见问题进行了分析，并提出了切实可行的 二抗、三抗选用不当以及C,D 配制错误。 对策，现介绍如下： 解决的有效方法是设立“阳性对照”，如果阳 !? 脱片 性对照有表达，说明染色过程和试剂无问题。反 脱片是免疫组织化学检测中最常遇到的现象之 之，表明检测过程中某个环节或试剂出了问题，应 一，主要是由于玻片处理不当、切片太厚、组织处 逐一查找原因。此外，为保证获得良好的阳性对照 理欠佳或组织的特殊特性所致。针对这些问题，应 切片，工作中收集抗原表达好的阳性蜡块，建立阳 该将玻片彻底清洗干净，即将新购买的载玻片一片 性对照蜡块库。 一片地放入洗衣粉水中浸泡!$2 左右；自来水冲洗 )? 假阳性 干净；蒸馏水冲洗- 遍，烤干；浸泡防脱片剂多聚 假阳性即阳性信号定位不正确，包括背景着 赖氨酸；烤干备用。切片以- @ ) !3 为宜，漂片要 色、边缘效应、着色不匀及组织的某些特定成分所 平整，不能有皱褶、气泡，并需*$A 烤!’2 以上。 致等。 固定脱水欠佳的组织如需进行微波修复亦易导致脱 ! ）切片背景着色 即切片全部着色（图! ）， 片，因此，组织应及时固定，脱水充分，透明浸蜡 无法分辨真正的阳性信号，其可能的原因有：一 适度。应尽量切薄，延长烤片时间，缩短抗原微波 抗体浓度过高或失效，故在每次使用新的浓缩型抗 修复时间和选用适当的抗原修复液［- ］。对于骨组 体之前做预实验，确定一个最佳浓度，同时注意抗 织和纤维成分较多的乳腺、皮肤等组织应将切片最 体的有效期。# 抗体孵育时间过长，或者温度过 高，应严格按操作程序执行。 C,D 显色时间太 好不超过- !3 厚，必要时切片后先微波! @ -3B9，