水杨基荧光酮荧光法测定钴χ2 过氧化氢系统产生的羟自由基.pdfVIP

( ) 第 29 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 1 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2001 年 1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 60～62 水杨基荧光酮荧光法测定钴 过氧化氢体系产生的羟自由基 任凤莲 　吴　南　司士辉 ( 中南工业大学化学化工学院 ,长沙 410083) 摘　要 　本实验发现 Co2 + 与 H O 反应生成羟自由基的产率比 Fenton 试剂的高 100 倍以上。采用水杨 2 2 ( ) 基荧光酮 salicylfluorone , SAF Co H O 荧光法测定羟自由基的新体系 ,激发波长和发射波长为 510 nm 2 2 和 500 nm ,测定体系在反应前后的荧光变化 ,可间接测定羟自由基产生量。此法不需昂贵的仪器设备 , 方法灵敏 ,操作简单易行。清除率实验及 ESR 波谱法检测证明了该方法的准确可靠 ,对于医用筛选抗羟 自由基药物及抗羟自由基机理研究等方面具有应用价值。 关键词 　羟自由基 ,水杨基荧光酮 ,过氧化氢 1 　引　　言 羟自由基是一种氧化能力很强的自由基 ,很容易氧化各种有机和无机物 ,氧化效率高 ,反应速度快 , 是造成生物组织脂质过氧化 ,蛋白质和多糖分解的重要活性氧。因此 ,对羟自由基的研究在生命科学及 环境科学等领域中引起了人们的广泛兴趣 ,而测定及筛选抗羟自由基物质是重要内容。目前 ,离体检测 〔1〕 〔2 〕 〔3 〕 〔4 〕 ·OH 的方法主要有电子自旋共振法 ,高效液相色谱法 , 比色法 ,无机荧光法 等。但是 ,羟自由 基的反应活性大 ,寿命短 ,存在浓度低。用上述方法检测 ,有的仪器昂贵 ,灵敏度低 ,有的测定难度大。 因此 ,有必要寻找建立一种既简便又灵敏 ,且对仪器要求不高的测定羟自由基的新体系。 2 + 〔5 〕 本文实验以 H O 作氧化剂 ,Co 可与 H O 作用 ,类似 Fenton 反应产生羟自由基 ;且羟自由基产 2 2 2 2 ( ) 率大为提高。再利用其产生的羟自由基氧化水杨基荧光酮 SAF ,使水杨基荧光酮的荧光强度发生变 化 ,从而间接地测定羟自由基的产生量。通过对测定条件的研究 ,得出最佳的实验方案。本方法对仪器 要求低 ,方法简便 ,选择性好 ,准确可靠 ,是可推广的一种新型测定羟自由基的有效方法。 2 　实验部分 21 　试剂和仪器 水杨基荧光酮 ,CoSO ·7H O ,1 %H O ,pH 9 缓冲溶液 ,苯甲酸 ,抗坏血酸 , 自旋捕捉剂DMPO 。所用 4 2 2 2