植物病毒分子检测方法概论.pdfVIP

2 002 年第 6 期　　　　　　植物检疫　PLAN T QUARAN TINE 　　　　　　Vol 16 　No 6 植物病毒分子检测方法概述 邵碧英 (福建出入境检验检疫局　福州　350001) 　　植物病毒粒体主要由核酸和蛋白外壳构 上形成有色斑点 ,斑点颜色深浅与抗原的量 ( ) 成 ,蛋白外壳由许多外壳蛋白 CP 组成。 成正比。也已用于各种病毒检测。 CP 和核酸因病毒的不同而异 ,是检测、 斑点法简便 ,反应时间短 ,反应结果可长 鉴定植物病毒的主要依据。广义的植物病毒 期保存 ,不需任何特殊设备 ,也适合于大量样 ( 分子检测方法包括蛋白质检测 或血清学试 品的测定。 ) ( ) 验 和核酸检测方法 ,本文分别介绍。 13 　直接组织斑免疫测定法 IDD TB 1 　以病毒外壳蛋白为基础的检测方法 与 EL ISA 相比 ,斑点法更为简便 ,但仍 植物病毒的 CP 具有抗原性 ,很多病毒 然需要提取病毒的粗提液或提纯制剂 ,试验 可以被提纯并制备成高效价的抗血清 ,根据 过程较繁琐。改进后的直接组织斑免疫测定 特异性的抗原抗体反应可检测植物病毒的存 是直接把植物组织切块固定于膜上 ,然后利 在。血清学方法有很多 ,应用较广泛的是酶 用抗原抗体特异反应来检测植物病毒。 联免疫吸附反应 ,在此基础上加以改进也发 鞠振林等[2 ] 以 IDD TB 检测病组织中的 展了一些新的检测方法。 马铃薯 X 病毒 Potato virus X 等多种病毒获 ( ) [3 ] 11 　酶联免疫吸附反应 EL ISA 得较好结果。徐明全等 采用 IDD TB 法从 ( EL ISA 是一种采用固相 主要为聚苯乙 兰花叶片中检测到建兰花叶病毒 Cymbidium ) 烯酶联板 吸附 ,将免疫反应和酶的高效催化 mosaic virus 。把石斛兰叶片从叶尖至叶尾每 ( ) 反应有机结合的方法。酶标抗体 或抗抗体 0. 5cm 切割 1 次并压印在膜上 ,检测结果可 与相应抗原反应时形成酶标记的免疫复合 直接显示出感染病毒的具体部位。 物 ,酶遇到相应的底物时产生颜色反应 ,颜色 组织印迹法明显比 EL ISA 和 DIBA 的 深浅与抗原量正相关。该方法已被用于各种 试验程序简单、快速。但病毒在植物的不同 植物病毒检测。 部位分布不均匀 , 同一样品要重复多次 , 以提 后来发展的用酶标 A 蛋白取代酶标抗 高检测的准确性。 抗体的 EL ISA 被称为 A 蛋白酶联吸附法 ( )