HPLC同时检测狭叶松果菊中松果菊苷和绿原酸的含量.pdfVIP

2013年5月 重庆师范大学学报(自然科学版) Mav2013 of Normal V01．30No．3 第30卷第3期 Journal Science) ChongqingUniversity(Natural HPLC同时检测狭叶松果菊中松果菊苷和绿原酸的含量+ 闰晓慧1，胡世俊1，谢峻2，冯 巍2，谈 锋2 (1．西南林业大学林学院云南省森林灾害预警与控制重点实验室，昆明650224； 2．西南大学生命科学学院，重庆400715) 摘要：采用反相高效液相色谱(RP—HPLc)的方法对狭叶松果菊组培苗不同部位、愈伤组织以及不同株系毛状根中的松果 菊苷和绿原酸进行了含量测定，建立同时测定狭叶松果菊组织培养物中松果菊苷和绿原酸含量的高效液相色谱方法；实 oDS 验采用KromasilC18柱，流动相为乙腈：甲醇：0．1％磷酸溶液(10：15：75)；检测波长为330nm。结果表明松果 98．5％(RSD—O．91％)。该法简便、准确，可作为狭叶松果菊组织培养物中松果菊苷和绿原酸的定量分析方法。 关键词：高效液相色谱；狭叶松果菊；次生代谢产物；松果菊苷；绿原酸 中图分类号：Q94．334；Q946 文献标志码：A 狭叶松果菊(Ef^i行口fP口口卵g“s醴厂ozi以DC)也称松了测定。为采用生物技术进一步开发利用狭叶松果菊 果菊，是菊科(Compositae)松果菊属(Ec^i行口fen)植提供科学依据。 物，原产美洲，是印地安人的传统草药，被用作治疗外 1仪器与试剂 伤、蛇咬、头痛及感冒已有上百年的历史口]。研究表明 松果菊提取物具有抗氧化、抗衰老、调控细胞凋亡、抗 研究所用主要仪器为：Waters液相色谱系统； 肿瘤等作用[2。3]，且疗效得到了越来越多的临床肯定， 是国际市场上需求量最大的植物药品之一。据报道， 万分之一分析天平；旋转蒸发仪；索式提取器；真空抽 松果菊的有效成分为酚酸类物质和多糖，主要包括松 滤系统；0．22“m微孔滤膜，烘箱。主要试剂为： 果菊苷、菊苣酸、咖啡酸、绿原酸等咖啡酸衍生物以及 4一。一甲基葡糖醛一阿拉伯糖一木聚糖、阿拉伯糖一鼠李半 为分析纯)；实验用超纯水。此外，松果菊苷对照品购 乳聚糖等多糖。这些活性成分通过增加细胞的数量提 高非特异免疫，是国际市场最受欢迎的免疫调节剂[4]。 购自中国药品生物制品检测所，纯度95％。 目前北京、沈阳、山东等地已成功引种松果菊[5]。由于 2方法 狭叶松果菊的深度休眠性种子萌发率极低，从而给松 果菊的发展带来很大困难。笔者所在研究团队曾以种 2．1HPLC色谱条件 子为材料进行组织培养，实现了狭叶松果菊的离体快 C18(150mm×4．6mm， 色谱柱为Kromasil 繁‘6|。 5肛m，100A)；流动相为乙腈：甲醇：o．1％磷酸溶液 绿原酸和松果菊苷是狭叶松果菊中咖啡酸衍生物 (10：15：75)；流速为1．omL／min；柱温为室温；进 的主要代表。绿原酸具有抗脂质过氧化、抗菌、抗诱变 样量为20肚L；检测波长在330nm。理论板数按绿原 剂等作用[73；松果菊苷具有抗氧化、抗肿瘤、调控细胞 酸计不低于6000，按松果菊苷计不低于4000，两组分 凋亡、抗衰老、神经保护等作用[8‘1…。本研究以适用于 与相邻色谱峰均达到基线分离，并经二极管阵列检测 小分子物质含量分析的反相高效液相色谱法(RP—器检测，证明它们为纯峰(图1加