高效溶栓菌株的筛选鉴定及发酵条件优化.pdfVIP

2013年5月 重庆师范大学学报(自然科学版) Mav2013 of Normal Science) V01．30No．3 第30卷第3期 JournalChongqingUniversity(Natural 高效溶栓菌株的筛选鉴定及发酵条件优化+ 王 丽，郝友进，何正波，和七一，陈治霖，陈 斌 (重庆师范大学活性物质生物技术教育部工程研究中心重庆高校生物活性物质工程研究中心昆虫与分子生物学研究所，重庆401331) 摘要：采用酪蛋白平板法，从纳豆激酶胶囊、纳豆及多种发酵食品中筛选出了146株产溶栓酶菌株；然后利用纤维蛋白平 637．6 板法比较发酵后溶栓酶活力，并从初筛菌株中筛选出1株溶栓酶活达1 IU／mL的高产菌株HT8；依据菌种形态和 生理生化特征以及16SrRNA基因序列分析，鉴定为枯草芽孢杆菌(Bncizf距ss“6￡izis)。在此基础上，对此高效溶栓菌株的 7)，通过软件SPSS分析确定该菌最佳发酵条件为 液体培养条件进行了单因素初步实验，方差分析后设计正交试验L，s(3 mI。(容量为500mL的三角瓶装90mI。的培养液)、o．5％牛肉膏和2％大豆蛋白 初始pH值8．o、温度40c、培养体积90 804．08 胨；优化后的相对酶活力达l IU／mL。研究结果为进一步开发纳豆等保健食品提供理论基础。 关键词：溶栓菌；菌种筛选；枯草芽孢杆菌；发酵条件；纳豆激酶 中图分类号：Q503；Q556 文献标志码：A 5“次以5舭托o)是从日本 纳豆芽孢杆菌(B口fizz“s 1材料与方法 传统大豆发酵食品纳豆中分离得到的一种产蛋白酶益 生菌Ⅲ属好氧型革兰氏阳性菌[2j。纳豆芽孢杆菌又称 1．1材料 纳豆菌，除了具有抗菌、调节肠道微生态平衡、提高免 本研究用以分离溶栓菌的样品包括：将门纳豆(大 疫力等益生功能外，在增殖过程中还产生的大量蛋白 连将门食品有限公司)、燕京纳豆(北京燕京中发生物 技术有限公司)、高纯度纳豆菌(北京纳康保健销售中 酶，能够提高蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等酶活性，使发 心)、佰禾美纳豆菌(北京源生素源生物科技有限公 酵产品中富含氨基酸、有机酸、寡聚糖等多种易被人体 司)、天津百德永生肽纳豆菌(天津百德生物工程有限 吸收的成分，且使发酵产品具有多种保健功能，如抗肿 公司)、海摩尔纳豆菌(海摩尔(北京)生物食品有限公 瘤、降血压等作用，还可预防骨质疏松、抗氧化等∞“j。 司)、常温纳豆菌(江苏创业园实验室)、川秀纳豆菌(江 纳豆菌产生的这种蛋白酶最早由须见洋行博士发现， 苏纳克生物工程有限公司)、第三代恒通纳豆菌(北京 并命名为纳豆激酶，为纳豆菌发酵的胞外产物，是一种 纳克生物工程有限公司)、易行纳豆菌(珠海市御品堂 可溶解交联纤维蛋白的碱性丝氨酸蛋白酶口]。纳豆激 生物科技有限公司)、昆虫与分子生物学研究所保存的 酶除有效溶解血栓外，还可降低血液粘度、抑制血小板 37株具有溶栓作