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第32卷第2期 中南民族大学学报(自然科学版) Vol.32 No.2
2013年6月 Journal of South-Central University for Nationalities(Nat.Sci.Edition) Jun.2013
海南斑等蝎钾通道阻断剂 Im58 的
克隆、表达 、纯化和鉴定
尹世金,兰 珍,李羽欣
(中南民族大学 生物医学工程学院,武汉430074)
摘 要 为表达钾离子通道阻断剂Im58,设计了4条搭桥 PCR 引物,通过 overlap PCR 的方法扩增出蝎毒肽 Im58
DNA全长片段,选用表达载体pGEX-4T-1 ,将测序正确的克隆转化至大肠杆菌 E.coli/ Rosetta(DE3)中.通过检测
不同诱导时间和IPTG浓度下融合蛋白的表达量,筛选出最优表达条件.表达蛋白经 IPTG 诱导后,融合蛋白再经
GSH亲和层析柱纯化,将洗脱液经超滤浓缩脱盐、纯化后得 GST-Im58 融合蛋白,蛋白用小肠激酶酶切后通过 RP-
HPLC C18 柱分离获得色谱纯的蝎毒肽.蝎毒肽通过 Tricine 系统的SDS蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量
大小和纯度,并由MALDI-TOF-MS来精确测定重组多肽的分子量.结果表明:Im58 阳性克隆子证明成功构建了
Im58原核表达载体,Tricine 系统的SDS蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS鉴定Im58多肽表达纯化成功.
关键词 钾离子通道阻断剂;Im58;原核表达;蛋白纯化
中图分类号 TQ464.9;Q784 A 文献标识码 A 文章编号 1672-4321(2013)02-0036-05
Cloning,Expression,Purification and Identification of Im58,
the Potassium Channel Blocker of ScorpionIsometrus maculates
Yin Shijin,Lan Zhen,Li Yuxin
(College of Biomedical Engineering ,South-Central University for Nationalities,Wuhan430074,China)
Abstract To express potassium channel blocker Im58,full length DNA sequencesof Im58wasamplifiedby overlap PCR
with four designed primers and the cloning with the right sequence was transformed to E. coli/ Rosetta (DE3) by vector
pGEX-4T-1. Under different inducing time and IPTG concentrations, the expressing quantities of fusion protein were
investigated to optimize the inducing conditions. Then the recombinant GSH-fusion proteins were purified by GSH affinity
chromatography,treated with enterokinase and purified by C18 column of RP-HPLC. The sample of Im58 purifying
peptides was obtained to identify themolecularweight andpurity by SD
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