栉孔扇贝Chlamys farreri壳顶幼虫血细胞分布的免疫学观察.pdfVIP

第42卷第6期 中国海洋大学学报 42(5)：072～076 CIIINA 2012年6月 PERIOI)[CAL()F(X：EANUNIVERSITY()F JuIL，2012 血细胞分布的免疫学观察+ 倪永庆，邢婧”，林听听，战文斌 (中国海洋大学海水养殖教育部重点实验审，山东青岛266003) 摘要：研究组前期实验发现，栉孔扇贝血细胞在D形幼虫时期出现。本文应用单克隆抗体的免疫组化、免疫电镜方法 进一步定位栉孔扇贝壳顶幼虫的血细胞并观察其分布。结果表明，栉7L扇贝壳顶幼虫已分化出界限明显的组织器官，包 括外套膜、面盘、口、食道．胃、消化腺、足等；血细胞卡要分布于壳顶幼虫的外套膜、面盘、食道、消化腺、胃等组织器官内及 周围，其中面盘、消化腺、胃等处有大昔血细胞成簇分布。血细胞形状不规则，直径为3～5呻；细胞核多为圆形、椭圆形， 位于细胞的一侧；细胞质内有线粒体，内质删等细胞器和李泡。结果证实，栉孔扇贝在壳顶幼虫时期已出现r大量清晰可 辨的血细胞，其分布特点与成贝血细胞相似。 关键词：栉孔扇贝Chlamysfar”一；壳顶幼虫；血细胞；单克隆抗体 1672—5174(2012)06—072—05 中图法分类号：Q959．215 文献标志码：A 文章编号： ． 血细胞是贝类免疫防御系统苇要的组成部分，可 参与炎症、伤V1修复、呼吸爆发、吞噬和包囊等作用f1]。2．5％戊二醛前固定，1％锇酸后固定，经梯度丙酮脱 1960一1970年代，研究者们主要对贝类血细胞分类和 水，环氧树脂包埋，聚合，超薄切片机连续切片。半薄 结构进行研究；1980年代以后，贝类血细胞的免疫防御切片厚度为2tan，脱去树脂u川，用于爱氏苏木精与曙红 功能备受关注[24]。近年来，贝类血细胞的发生和分化 染色(HE染色)与免疫组化；超薄切片厚度为70nnl．， 开始成为研究热点，研究者们多采用单克隆抗体埘贝 用于免疫电镜。 类m细胞进行组织定位，在应用抗血细胞单克隆抗体 免疫组化所用的第一抗体为四株抗栉孔扇贝血细 对紫贻贝(Mytilusedulis)各期胚胎幼虫研究中发现 在第1～4天的幼虫出现了血细胞曲1；在牡蛎(Ostrea edulis)中应用抗颗粒细胞单克隆抗体发现了其颗粒细 磷酸酶标记链亲和素、碱性磷酸酶底物AP-Red试剂 胞fn现在第30～32天牡蛎幼虫鳃的结缔组织和上皮细 盒购自北京中杉金桥生物公司，胶体金(SPA)标记羊 胞之间r6]。研究组在制备出抗栉孔扇贝(Chlamysfar— 抗小鼠IgG购自SIGMA公司，金颗粒直径为10nm。 reri)血细胞的单克隆抗体的基础上，应用单克隆抗体定 位了栉孔扇贝稚贝的造虹组织L73；并发现血细胞出现在 D形幼虫期，数量较少，分布仅局限于消化器官周附引。 氧树脂(Epon一812)购自SERVA公司。 相比于D形幼虫，壳顶幼虫的细胞与组织分化快，消化 1．2方法 1．2．1 器官、循环系统等发育更加完善，功能增强。本文采用 HE染色与免疫组化 将半薄切片置于爱 半薄切片的组织化学染色法和单克隆抗体的免疫组化 氏苏木精染液内，60℃染色1h，蒸馏水冲洗lmin， 方法、免疫电镜方法，研究栉扎扇贝D形幼虫期后的壳 1％曙红染10rain，蒸馏水冲洗，50％