BMSCs分化为NCs的拉曼光谱研究.pdfVIP

第45卷第3期 郑州大学学报(理学版) V01．45No．3 2013年9月 Univ．(Nat．Sci．Ed．) Sep．2013 J．Zhengzhou BMSCs分化为NCs的拉曼光谱研究 张晓利1， 柳 璐2， 刁振琦1， 李云涛1， 熊 洋1， 张建民1， 唐伟跃1 摘要：分离培养大鼠BMSCs并诱导分化为NCs，应用拉曼光谱仪测定两种细胞的光谱，分析细胞内部蛋白质、核 酸、脂类等含量、构象和构型变化．结果发现，骨髓间充质干细胞的拉曼光谱与神经细胞之间存在较大的差异．表现 603 为：646cm。1处和719cm一处的拉曼峰在神经细胞内消失；神经细胞在1 cm“处出现新的拉曼峰，归属为苯丙 738 746 氨酸和酪氨酸的c—c弯曲振动；1 cm。1处拉曼峰在神经元样细胞中频移到1 cm‘1处．试验表明拉曼光谱 有望成为鉴别BMSCs与NCs的一种有效新方法． 关键词：骨髓间充质干细胞；神经细胞；拉曼光谱；分化 中图分类号：O657．3 文献标志码：A 文章编号：1671—6841(2013)03—0077一04 DoI：10．3969／j．issn／1671—6841．2013．03．018 0引言 神经系统疾病是指发生在中枢神经系统、植物神经系统以及周围神经系统中的表现为意识、运动、感觉、 marrow stem 植物神经功能障碍的疾病…．骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal 能修复和替代损伤的神经元样细胞，但到目前为止还没有具体的鉴定骨髓间充质干细胞的方法．虽然BM— 面标记物心1；加上BMSCs的免疫表型的复杂性，所以研究鉴定骨髓间充质干细胞的方法刻不容缓． 拉曼光谱是一种分子识别与无损检测技术，可以提供分子结构信息．SERS光谱使拉曼光谱能够广泛应 用于分子生物学领域∞』．干细胞是由蛋白质、核酸、脂类及糖等生物大分子构成的，在细胞分化过程中这些 化过程，以期为鉴定骨髓间充质干细胞及其分化的神经细胞提供一种有效的光谱方法，使BMSCs能够更好 地应用于医学临床． 1材料与方法 1．1实验材料及仪器 ishaw公司的RM2000型激光共焦显微拉曼光谱仪． 1．2实验方法 为13 mol／L)与硝酸铁(浓度为0．04mol／L)组成的溶液中，放入水热釜中，温度由室温逐渐升高到150oC， 腐蚀40min．降温取出晾2h后自然存放1 光谱对杂质很敏感，故在使用前，先将Ag／Si—NPA在浓度为0．01 mol／L的AgNO，溶液内浸泡5min，变白后 收稿日期：2012—12—21 tangwy@ZZU．edu．cn． 万方数据 78 郑州大学学报(理学版) 第45卷 放人三蒸水中清洗，再放入浓度为0．1mol／L的KCl溶液中浸泡25ml‘n，三蒸水清洗3遍后晾干，即制得优 化的SERS活性基底A∥Si—NPA． 细胞培养：将120g的sD大鼠颈椎脱臼处死，用体积分数为75％的酒精浸泡5min，手术器械剪开SD 大鼠的皮肤，分离出其胫骨、股骨后，快速放在PBS溶液冲洗，防止血凝固．接着剪掉胫骨、股骨的骨骺端，露 出两端的骨髓腔．用5 复冲洗骨髓腔至骨髓腔发白，将冲出的细胞吸人无菌离心管中，用吹打管轻轻吹打5遍制成细胞悬液． 000 mL 将装有细胞悬液的离心管放入离心机内离心10min，转速为1 r／min，离心后去除上层液体．用6 的骨髓间充质干细胞培养液重悬，再吹打5遍，获得单细胞悬浮液．用移液管将悬浮液移人25cm2的培养瓶