不同保存条件下白刺属植物基因组DNA的提取.pdfVIP

第45卷第2期 郑州大学学报(理学版) V01．45No．2 2013年6月 Univ．(Nat．Sci．Ed．) Jun．2013 J．Zhengzhou 不同保存条件下白刺属植物基因组DNA的提取 张 玲1”， 王旭哲3， 李先勇1， 李志军1’2， 舒尊哲1’4’5 (1．新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护与利用重点实验室新疆阿拉尔843300； 摘要：以硅胶干燥的白刺叶片为材料，分别在一84℃、一20cc冰箱保存和常温保存，对三种不同保存条件下的白刺 叶片进行DNA的提取，结果表明，在一84℃和一20qC冰箱里保存1～2年的材料均可采用3×CTAB法有效去除多 糖、酚及蛋白质，可获得高质量基因组DNA，而常温保存半年的材料无法获得DNA．通过进行ISSR·PCR实验，提取 中条带数目和清晰度明显优于一20℃保存的材料． 关键词：白刺属；保存方法；DNA提取 中图分类号：Q943 文献标志码：A 文章编号：1671—6841(2013)02—0099—05 DOI：10．3969／j．issn／1671—6841．2013．02．022 0 引言 白刺属(NitrariaL．)植物主要分布于西北干旱、半干旱地区，是荒漠地区生态系统植物群落的重要建群 种或优势种之一，该属植物具有耐旱、耐盐碱、抗风蚀、耐沙埋等特点…，是西北地区典型的优抗植物，在维 持生态平衡上发挥着重要的作用．新疆是典型的荒漠地区，也是白刺属植物的主要现代分布中心和分化中 心心]．在天山以南分布有五种白刺[3]，在生态坏境的维持和稳定方面起到了重要作用．白刺一直是研究者们 o、分子系统分类和 比较青睐的研究对象，近几年在形态解剖学H。5]、系统发育№J、抗性研究17‘91、生态学¨0。11 标记方面均有所发展¨2。”1． 基因组DNA的提取是一个常规的实验，也是分子实验非常重要的前提和基础．得到高质量的DNA是后 续分子实验能顺利进行和实验结果可靠性保证的必要条件．CTAB法是最常用的植物基因组DNA提取方法 的CTAB法，经多次实验改进后形成了现在较为普遍的、简洁的方法．由于细胞结构或细胞内含有大量的次 生代谢产物，使得难以提取到高质量的DNA，尤其是环境恶劣条件下生长的干旱区、荒漠植物等．提取植物 基因组DNA最主要的就是要去除多糖、酚以及蛋白质，这是影响DNA得率和质量的重要影响因素，也是分 子实验能否顺利进行的关键因子之一． 为了克服多酚、多糖等次生物质对DNA纯度的干扰，提高DNA的得率和质量，作者对新疆天山以南五 种白刺属植物的DNA进行了提取．针对硅胶干燥后不同保存条件下白刺属植物叶片材料，探讨和确定白刺 子生物学研究和遗传学分析，为白刺属植物的后续研究奠定基础． 收稿日期：2012—10—06 号2011ABOl5；塔里木大学校长基金硕士项目，编号TDZKSS07001． 授，博士，主要从事植物学研究，E·mail：lizhijun0202@126．corn． 万方数据 100 郑州大学学报(理学版) 第45卷 1 实验部分 1．1材料 一84℃冰箱中；2009年的部分样品用硅胶干燥后，常温保存和一20℃冰箱中保存． mol／L mol／L mol／L 提取缓冲液的配制：3％或4％CTAB，0．1 8．0)，0．25 EDTA(pH8．0)，1．2 Tris—HCl(pH U／t001)、500bp NaCl，3％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)．ISSR引物由西安沃尔森生物技术有限公司合成，Taq酶(2 DNALadder Ma