模拟酶催化荧光分析法测定过氧亚硝酸根阴离子.pdfVIP

第44卷第4期 郑州大学学报(理学版) V01．44No．4 2012年12月 Univ．(Nat．Sci．Ed．) Dec．2012 J．Zhengzhou DOI：10．3969／j．issn／1671—6841．2012．04．017 模拟酶催化荧光分析法测定过氧亚硝酸根阴离子 王瑞勇， 康小慧， 吴 静， 尹瑜静， 范淑敏 (郑州大学化学与分子工程学院河南郑州450001) 摘要：基于血红蛋白催化过氧亚硝酸根阴离子(ONOO～)氧化L一酪氨酸的反应，建立了一种测定ONOO一的新方 法．在优化实验条件下，酪氨酸荧光强度随ONOO一浓度增大而猝灭，产物酪氨酸二聚体的荧光强度随ONOO一浓度 X10～～5．0X 增大而增强．ONOO一浓度在3．0 10～moL／L范围内与酪氨酸的相对荧光强度呈线性关系，检出限为 1．12×10一mol／L；ONOO一浓度在3．0×10～～3．0×10。6mol／L范围内与产物酪氨酸二聚体的相对荧光强度呈 线性关系，检出限为1．31×10～mol／L．将该方法用于样品分析，结果令人满意． 关键词：过氧亚硝酸；血红蛋白；酪氨酸；荧光 中图分类号：O655．9 文献标志码：A 文章编号：1671—6841(2012)04—0078—05 0 引言 ONOO一具有很强的生物氧化性、活性和不稳定性，参与细胞内重要的氧化还原反应，是当前生命科学领 域研究的热点‘1J．目前，表征ONOO一及其分子反应活性的方法主要有紫外一可见光度法拉J、荧光法旧J、电化 物体内的浓度极低，因此对于ONOO一的检测较困难．当前主要有两种检测途径：一种是荧光探针法，即基于 ONOO一与一些无荧光的化合物反应生成具有较强荧光的产物为探针的方法进行测定，常用的荧光染料有二 内的血红蛋白可用作辣根过氧化物酶的模拟酶。8J，催化ONOO一与酪氨酸反应产生具有较强荧光的荧光二 聚体产物，在此反应中，过氧亚硝酸不易直接与酪氨酸反应，而是先分解产生自由基(·OH和·NO，)，而 后再与酪氨酸分步作用一1．此外，ONOO一对酪氨酸本身的荧光强度有猝灭作用，据此建立了一种新的高灵敏 测定ONOO一的方法，检出限可达1．12×10一mol／L，方法简单易行，成本低． 1 实验部分 1．1仪器与试剂 温水槽(北京中兴伟业仪器有限公司)；PHS．3C数字型精密pH计(上海雷磁仪器厂)． 酪氨酸储备液(1．0×10。3mol／L)的配制：准确称取0．018g酪氨酸溶于100mL容量瓶中(其中含 2．0mL0．1mol／L x10‘5 mL HCl溶液)；血红蛋白(Hb)储备液(2．0mol／L)的配制：取0．034Hb溶于25 g 容量瓶中；ONOO一储备液的配制方法参考文献[10]．合成的过氧亚硝酸溶液存放于棕色瓶中，所有溶液均置 于冰箱(4cc)保存．实验用水为二次蒸馏水，其他试剂均为分析纯． 1．2 ONOO一标准溶液的制备 将125mL含有5．0 mL含有7．5 gNaNO：溶液加入到125 mL体积 mL体积分数30％的H：O：溶液和2．0 收稿日期：2012—03—08 基金项目：国家自然科学基金资助项目，编中国博士后科学基金资助项目，编号20100471004 作者简介：王瑞勇(1974一)，男，副教授，博士，主要从事生物分析研究，E-mail：wangry@zzu．edu．cn． 万方数据 第4期 王瑞勇，等：模拟酶催化荧光分析法测定过氧亚硝酸根阴离子