农药氟虫腈作用下斑马鱼miR155对UHRF1的调控作用.pdfVIP

浙江理工大学学报，第30卷，第6期，2013年11月 of Sci—Tech Joumal Zhejiang University V01．30，No．6，Nov．2013 文章编号：1673—3851(2013)06—089卜05 i R一1 农药氟虫腈作用下斑马鱼m 55对 洲尺F7的调控作用 张杰，张凯，李鹿丰，郭江峰 (浙江理工大学生命科学学院，杭州310018) 摘要：农药氟虫腈对生物体具有慢性神经毒性，对生态环境具潜在的危险性。通过实验分析不同浓度氟虫腈 等农药处理后，miRNA和相关靶基因在核酸和蛋白水平的表达，有助于明确miRl55和相关靶基因在外源化学物 质毒理学效应中的作用与关系。本研究以dr}miR一155为研究对象，通过生物信息学分析，对其靶标进行预测，结合 互补“种子”序列、结合的自由能以及各数据库中的排位等因素，选取所预测靶基因UHRFj进行研究，并利用荧光定 量PCR、westem 的表达有负调控作用。miR_155对UHRFj的调控作用的研究对毒理学、生物医学等领域具有重要意义。 关键词：氟虫腈；mi融155；斑马鱼；UHRFj；毒理学；生物医学 中图分类号：Q89 文献标志码：A miRNA的靶基因[4。10|。大量研究表明，miRNA参 0前言 与了包括细胞分裂增殖、分化与发育以及代谢等许 根据生态毒理学的观点，化学物质的刺激往往 多重要的生物学过程[11。，对基因功能研究、人类疾 会直接或间接引起基因表达发生改变。农药氟虫腈 病防治及生物进化探索有重要意义。 杀虫效果好，使用范围广，它的大面积使用会对人体 本项目组前期研究利用miRNA芯片研究了农 健康以及水产养殖带来不良影响。研究表明，氟虫 药三唑磷微乳剂、氟虫腈微乳剂以及其混合物对斑 腈能提高啮齿目动物肝代谢功能和刺激甲状腺激素 马鱼的miRNA表达的影响[12|，结果表明，包括 的分泌，进而有诱发甲状腺癌的可能，且具有慢性神 经毒性，因此被定为C类致癌物质[1]。 了改变。miR_155是一个具有代表性的多功能 MicroRNA(miRNA)[2]是由长的具有发夹结构miRNA，参与免疫、炎症、血细胞生成及病毒感染等 的pri—RNA分子，经过Dicer加工形成的一类非编多种生物学过程[13|，且在肿瘤的发生过程中起到癌 码的小RNA分子(约21～23nt)。它能够通过与 靶mRNA特异性的碱基配对，引起靶mRNA的降因，，lUHR同在食管癌组织中的表达量显著升高， 解或者抑制其翻译，从而对基因进行转录后表达的 与食管癌分化程度和患者预后相关[14|，并且^U_ 调控[3]。故准确预测和鉴定其靶基因对于研究 miRNA的功能具有重要的意义。目前国内外主要生长[1 利用生物信息学方法和生物学实验预测和鉴定 PHD结构域结合二甲基和三甲基的H3K9多肽，具 收稿日期：2013一03—01 基金项目：浙江省自然科学基金项目(I。；浙江省大学生科技创新活动计划项目(2012R406063) 作者简介：张杰(1986一)，男，浙江湖州人，硕士研究生，研究方向为：miRNA靶基因的鉴定和功能研究。 通信作者：郭江峰，E_mail：j培uo@zstu．edu．cn 万方数据 浙江理工大学学报 2013年第30卷 6|。 有对DNA和组蛋白甲基化的双重识别功能[1 为进一步研究氟虫腈对miR-155及其潜在靶有2种计算方法均预测到的miRNA结合位点；结合 基因的表达影响，本研