Bt新菌株Rpp39的筛选、鉴定及杀虫晶体蛋白基因分析.pdfVIP

Bt 新菌株 Rpp39 的筛选、鉴定及杀虫晶体蛋白基因分析 农学院 生物技术专业 唐杰 （指导教师：刘永建副教授 李平教授） 摘要：本研究采用的 Rpp39 是从四川生态条件下分离的一株苏云金芽孢杆菌，经形态、 生理生化测定，该菌为苏云金芽孢杆菌杀虫变种（Bacillus thuringiensis var entomocidus ）。 生物测定结果表明，该菌对菜青虫（Pieris rapae L . ）具有很高的毒杀作用。根据Genebank 中的 cry 基因序列设计了几对引物，对该菌所含有的 cry 基因型进行了初步鉴定。结果表 明，该菌不仅含有对鳞翅目（Lepidoptera ）高毒力的cry 1 类中的 cry 1Aa，cry 1Ab 和 cry 1Ac 基因，还含有对双翅目（Diptera ）高毒力的cry2 类基因、对鞘翅目（Coleoptera ）高毒力 的 cry3 类基因以及对线虫（Pratylenchus spp.）有活性的 cry5类基因。 关键词：苏云金芽孢杆菌，杀虫晶体蛋白基因，PCR Screening, Identification of One Novel Bt Strain Rpp39 and Analysis of Its cry-type Gene By Tang Jie ，Major in biotechnique in college of agriculture Directed by associate prof. Liu Yongjian and prof. Li Ping Abstract: Strain Rpp39 in the research is a strain of Bacillus thuringiensis isolated from Sichuan ecosystem. According to the identification of modal, physiological and biochemical characters, this strain belongs to Bacillus thuringiensis var entomocidus. Bioassay showed that this strain appeared high insecticidal activity against Pieris rapae L . Primers were then designed to identify the genotype of cry genes. The results indicated that this strain contains cry 1Aa， cry 1Ac，cry 1Ab genes highly toxic to Lepidoptera and cry2 gene highly toxic to Diptera and cry3 gene highly toxic to Coleoptera and cry5 genes highly toxic to Pratylenchus spp.． Key words：Bacillus thurigiensis, Insecticidal crystal proteins gene, PCR 1 文献综述 1.1 苏云金芽孢杆菌的一般特性 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis ，简称Bt ）是一种分布广泛的革兰氏阳性细菌。 它是一种微生物杀虫剂，在形成芽孢的同时能够产生由一种或几种杀虫晶体蛋白 (Insecticidal Crystal Proteins，ICPs)组成的伴孢晶体[1-3] 。Bt 的杀虫活性与其携带的编码ICP 1 [4]