人前脂肪细胞株HPAv的培养及诱导分化.pdfVIP

深 圳 职 业 技 术 学 院 学 报 2009 年第 5 期 Journal of Shenzhen Polytechnic No.5, 2009 人前脂肪细胞株 HPA-v 的培养及诱导分化 张丽君，黄志立，吴晓明 （深圳职业技术学院 应用化学与生物技术学院，广东 深圳 518055） 摘 要：为建立稳定的人源前脂肪细胞株体外诱导分化模型，作者研究了人源原代前脂肪细胞株 HPA-v 的生长及分化过程．研究结果表明 HPA-v 细胞的生长潜伏期为 2 天，第 3 天细胞进入对数生长期，第 5 天细 胞生长停滞．显微镜观察、油红 O 染色、GPDH 活性检测结果表明第 3 天细胞分化特征开始出现，细胞内脂滴 含量开始增加，GPDH 活性开始升高，12 天左右基本分化为成熟的脂肪细胞，脂滴含量及 GPDH 活性达到最 高峰． 关键词：前脂肪细胞；HPA-v；诱导分化 中图分类号：R331 ；R457 文献标识码：A 文章编号：1672-0318 （2009 ）05-0059-04 脂肪组织作为一个重要的内分泌器官，内脏 岛素和 IBMX，DHAP ，DEX （购于 Sigma）；其 脂肪堆积过多是导致代谢综合症的重要原因，脂 他均为国产分析纯． 肪细胞分泌的AGT ，ACE ，renin ，脂联素、抵抗 1.2 实验方法 素、瘦素等与心血管疾病、2型糖尿病等都具有密 1.2.1 HPA-v 前脂肪细胞的培养 切的联系．大多数关于脂肪形成过程中分子机制 用含 10% FCS ﹢DMEM 培养液，在 37℃， 和信号转导途径的研究都采用前脂肪细胞系为体 5% CO2 的培养箱中进行培养，隔天换液，细胞汇 外模型．目前最常用是鼠源前脂肪细胞系3T3-L1 合达 90%左右时再传代培养． [1] 和3T3-F442A ，其为稳定传代细胞株 ．但来自 1.2.2 HPA-v 前脂肪细胞生长曲线测定 不同种属的前脂肪细胞株分泌和表达蛋白产物存 4 2 采用细胞计数法．细胞按约 10 个/cm 的密度 在较大的差异，甚至同一种属的不同个体，也有 接种于 24 孔培养板中，普通培养基、37℃、5% CO2 差异，即使同一机体的不同部位的前脂肪细胞表 的环境中培养．分别在第 1，2，3，4，5，6，7 d 达分泌的蛋白种类和数量也不尽相同．与鼠源 消化细胞，用 0.4%的台盼蓝染液染色2-3 min， 3T3-L1和3T3-F442A相比，人源原代前脂肪细胞 然后用血球计数板对未着色的活细胞计数，取 3 株 （HPA-v ）来源人内脏，分泌功能较强，作为 复孔，每孔取 3 次．以培养时间为横坐标，活细 研究模型更具有参考价值[2, 3] ．本文以HPA-v细胞 胞数为纵坐标绘制生长曲线． 株为研究材料，初步研究了其生长及分化特性， 1.2.3 HPA-v 前脂肪细胞的诱导分化 为进一步研究脂肪细胞分化机制提供依据． HPA-v 人前脂肪细胞在 10%FCS+DMEM 培 养基、5%CO ，37℃的环境中培养，隔天换液．待 1 材料与方法