BacillusamyloliquefaciensES2发酵产抗菌脂肽消泡剂的筛选及.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（２）：８５９０ ? ＢａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓＥＳ２发酵产抗菌脂肽 消泡剂的筛选及脂肽的提取和纯化 魏　浩　陆兆新　吕凤霞　翟亚楠　郭　昊　郝　慧　别小妹 （南京农业大学食品科学与技术学院酶工程实验室　南京　２１００９５） 摘要　将大豆油、有机硅消泡剂和聚醚类消泡剂 ３种消泡剂分别用于Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＥＳ２抗菌脂肽发酵，研究表明大豆油既可以实现消泡，又有利于抗菌脂肽的发酵，使其产量达到 了２４９７．６７ｍｇ／Ｌ。经过提取得到纯度为５５．６８％的产品，提取率达到８８．７２％。此外还比较了不 同大孔树脂对抗菌脂肽吸附和解吸附效果，发现大孔树脂Ｘ５最适合抗菌脂肽的纯化。纯化的工 艺参数为：上样浓度１４．４ｍｇ／ｍｌ、上样速率１ｍｌ／ｍｉｎ，洗脱速率２ｍｌ／ｍｉｎ、洗脱剂用量２．５ＢＶ，产品 的回收率达９０．０１％，纯度达７４．４％。 关键词　抗菌脂肽　消泡剂　大孔树脂 中图分类号　Ｑ８１９ 　　抗菌脂肽是由革兰氏阳性芽孢杆菌通过非核糖体 过程产生的影响，寻找合适 Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ［１３］ 合成途径产生的抗菌代谢产物 ，其分子由一个 １３ ＥＳ２发酵的消泡剂，确定抗菌脂肽提纯方法，为抗菌脂 １９碳脂肪酸链和一个含有７～１０个氨基酸的肽链两部 肽工业化应用提供参考。 分组成，因此兼有亲水和亲油特性。氨基酸与烃链上 ［４７］ １　材料和方法 的羟基或氨基以内酯或酰胺键结合形成环型脂肽 。 目前发现的抗菌脂肽主要包括 ｓｕｒｆａｃｔｉｎ、ｆｅｎｇｙｃｉｎ、 １．１　材　料 ｉｔｕｒｉｎ、ｂａｃｉｌｌｏｍｙｃｉｎ、ｍｙｃｏｓｕｂｔｉｌｉｎ和ｐｌｉｐｓｔａｔｉｎ等，它们表 １．１．１　 菌 种 　 淀 粉 液 化 芽 孢 杆 菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ 现出表面活性剂的特性及抗血凝、抗病毒、抗肿瘤、抗 ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓＥＳ２为南京农业大学食品科技学院酶 ［８９］ 支原体、抗原虫、抗真菌活性和抗细菌的作用 ，在食 工程实验室保藏。 品、化妆品、农业、医药等领域具有应用前景［１０１１］。 １．１．２　培养基　液体发酵培养基（Ｌ）：葡萄糖２０．０ｇ， 　　在研究中发现抗菌脂肽作为一种表面活性剂，在 Ｌ谷氨酸钠５．０ｇ，ＭｇＳＯ０．５ｇ，ＫＣｌ０．５ｇ，ＫＨＰＯ １．０ｇ， ４ ２ ４ 搅拌和通气的环境下，极易产生大量泡沫，降低了罐 ＦｅＳＯ０．１５ｍｇ，ＭｎＳＯ ５．０ｍｇ，ＣｕＳＯ ０．１６ｍｇ，ｐＨ７．０。 ４ ４ ４ 效［１２１４］。如何解决抗菌脂肽发酵中产生的泡沫问题极 发酵试验在３２℃原位灭菌发酵罐（１９Ｌ）中进行。 为重要。发酵工业中一般采用消泡剂进行消泡，通常 １．２　方　法 采用天然油脂、聚醚类消泡剂、高碳醇、硅类和聚醚改 １．２．１　消泡剂消泡能力的比较　在３个５００ｍｌ的量筒 性硅。我们实验室在已往的研究中，对淀粉液化芽孢 中分别加入１００ｍｌ的发酵液，以３Ｌ／ｍｉ