eIF4E腺病毒载体构建及对乳腺癌MCF7细胞转移能力的影响.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（３）：８～１２ ｅＩＦ４Ｅ腺病毒载体构建及对乳腺癌ＭＣＦ７ ? ? 细胞转移能力的影响 张国强　潘　薇　赵　亮　庞　达 （哈尔滨医科大学附属第三医院　哈尔滨　１５００８１） 摘要　目的：构建乳腺癌真核细胞起始因子———４Ｅ（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ４Ｅ，ｅＩＦ４Ｅ）基因重 ? 组腺病毒载体，并观察其对乳腺癌细胞ＭＣＦ７转移能力的影响。方法：应用基因重组技术将ｅＩＦ ? ? ４Ｅ基因构建于腺病毒载体ｐＡＤＸ，转染２９３包装细胞得到高滴度重组腺病毒，并用ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ ? ? 进行ｅＩＦ４Ｅ基因表达的验证。将重组腺病毒ｐＡＤｅＩＦ４Ｅ感染ＭＣＦ７细胞，应用ｓｉＲＮＡ封闭ｅＩＦ ? ? ? ? ? ４Ｅ后通过ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室法观察其对细胞侵袭和运动能力的影响。结果：酶切结果与预期相符， ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ可检测到转染后ＭＣＦ７细胞有ｅＩＦ４Ｅ基因过表达。且病毒转染后ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室可 ? ? ? 见，与ｅＩＦ４Ｅ过表达组相比较，ｅＩＦ４ＥｓｉＲＮＡ封闭组ＭＣＦ７细胞的侵袭和运动能力均受到显著的 ? ? ? 抑制（均为ｐ＜０．０１）。结论：重组ｅＩＦ４Ｅ腺病毒载体正确构建，抑制ｅＩＦ４Ｅ的表达，对乳腺癌细 ? ? 胞ＭＣＦ７的侵袭和运动都有抑制作用。 ? 关键词　ｅＩＦ４Ｅ　重组腺病毒　乳腺癌ＭＣＦ７细胞　ＲＮＡ干扰　侵袭和运动 ? ? 中图分类号　Ｑ７８９ 　　帽结合蛋白ｅＩＦ４Ｅ是真核细胞转录起始因子，可选择 ? １　材料与方法 性增强一些具有复杂的５′ＵＴＲ二级结构基因的ｍＲＮＡ翻 译过程，在多种恶性肿瘤中高表达，调控肿瘤恶性相关基 １．１　材　料 ［１］ 因和因子的表达，参与肿瘤的侵袭和转移 。研究显示， １．１．１　菌种与质粒　ＤＨ５ 感受态大肠杆菌购自ＴａＫａＲａ α ｅｌＦ４Ｅ基因可以促进乳腺癌转移，它在正常乳腺上皮中至 公司；ｐＤＮＲｄｕａｌｅＩＦ４Ｅ质粒，由中国科学院杜杰博士惠 ? ? ? ? 低表达，而在乳腺癌中表达量增加３～３０倍，能特异性地提 赠；ｐＬＰＡｄｅＸＣＭＶ载体购自ＢＤＣｌｏｎｔｅｃｈ公司。 ? ?? 高多种癌基因的转录活性，上调血管内皮生长因子 １．１．２　细胞系　人胚肾２９３包装细胞和人乳腺癌细胞 （ＶＥＧＦ）、细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎＤ１）、基质金属蛋白酶 ９ ＭＣＦ７，均购自ＣＣＴＣＣ。 ? ? （ＭＭＰ９）的