分子生物学实验技术-广东嘉应学院.ppt

分子生物学实验 目 录 实验一、植物染色体DNA的提取及纯度鉴定 实验二、大肠杆菌质粒DNA的提取 实验三、琼脂糖凝胶电泳 实验四、ＤＮＡ的限制性酶切 实验五、大肠杆菌感受态细胞的制备及外源DNA的转化 实验六、PCR基因扩增技术 实验一、植物染色体DNA的提取 及纯度鉴定 一、实验目的 掌握真核植物基因组染色体DNA的一种提取方法 学习使用紫外分光光度法鉴定DNA的纯度，估计相对含量。 二、实验原理 用低温机械研磨和高浓度、SDS等破坏细胞壁及膜，使蛋白变性使DNA与蛋白分离，用一定浓度的溶液将DNA提取出来，用高浓度乙醇沉淀DNA，氯仿/异戊醇等去除杂质，RN ase降解核酸，得到纯度较高的DNA样品。根据核酸与蛋白质分别在OD260和OD280有吸收峰分别测定之，比较OD260/OD280比值在1.8附近程度估计纯度，依据经验公式计算DNA含量。 三、实验材料与试剂物品 1.材料 香椿（Toona sinensis）黄花苗 2、试剂 提取缓冲液（预冷） SSC RNase液 3、仪器设备 高速冷冻离心机（8-316） 制冰机（8-312） 紫外可见分光计（8-316） 冰箱（-86度在8-312，-20度，4度在8-312） 水浴锅 电子天平 玻璃仪器等 四、实验操作流程 采摘芽苗，洗净→剪小段，擦干表面水分→放-86度冰箱冻30分钟以上→冰浴研磨匀浆（分次加提取液