光谱法比较木犀草素及槲皮素与牛血清白蛋白相互作用.pdfVIP

第30卷，第6期 光谱实验室 V01．30，No．6 0 ChineseJournal 3 2 1 of 3年11月 SpectroscopyLaboratory 光谱法比较木犀草素及槲皮素与牛血清白蛋白 相互作用① 邹淑君②许树军 董黎明 徐赐马英丽 (黑龙江中医药大学药学院哈尔滨市和平路24号150040) 摘要在模拟生理pH条件下，采用荧光光谱、紫外一可见吸收光谱、同步荧光光谱和圆二色谱法研 究木犀草素及槲皮素与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用的异同。结果确定木犀草素及槲皮素对BSA的荧 光猝灭是以静态猝灭为主，同时伴随非辐射能量转移猝灭。木犀草素结合BSA的位点与荧光发射基团的 距离比槲皮素的小。结合常数Ka表明二者与BSA的结合都属于强的非共价键结合，且结合位点数都约为 1。二者均主要通过氢键和范德华力与BSA作用。二者都能影响BSA的酪氨酸残基附近环境的极性，且高 浓度下能够引起BSA构象轻微地改变。结果表明黄酮C环上3位羟基的引入会降低其对BSA的亲和力。 关键词木犀草素；槲皮素；牛血清白蛋白；光谱法 中图分类号：0657．32；0657．39文献标识码：A 1 引言 黄酮类化合物有广泛的药理活性，被吸收到血液里往往与血清蛋白发生相互结合而达到运送 和分布的目的[1]。黄酮与蛋白结合作用的程度、强弱、位点等因素都可能影响它们的吸收、运输、释 放及药效等。因此探索黄酮类药物一蛋白质相互识别部位的结构特征及构效关系，有助于深人认识 黄酮与蛋白质相互作用的机理；同时也有助于人们对黄酮类药物进行分子设计。 木犀草素(I．uteolin)存在于多种中草药中，临床已用于止咳、祛痰、消炎止痛、抗肿瘤、抗过敏、 清除自由基、抗肿瘤、降低血压、保护心肌缺血再灌注损伤、抗病毒等作用，其维生素P样作用应用 于临床已久[3]。二者均属于天然黄酮类化合物，结构式见图1。 0H R=H术犀革素 R=OH槲皮素 图1 木犀草素和槲皮素的结构式 ①黑龙江中医药大学校基金项目(201103)；黑龙江省中医药管理局项目(ZHYIO—Z06) ②联系人，手机：(0E·mail：zou—sjl974@163．com 作者简介：邹淑君(1974一)，女，内蒙古赤峰市人．副教授，博士研究生，主要从事药物合成与药物活性研究。 收稿日期：2013—05一11；接受日期：2013—05．17 万方数据 第6期 邹淑君等：光谱法比较木犀草素及槲皮紊与牛血清白蛋白相互作用 响。 2 实验部分 2．1试剂与仪器 PB一20型pH计(德国赛多利斯仪器有限公司)。 木犀草素及槲皮素(均为98％，中国药品生物制品检定所)，二者分别用少量甲醇溶解后，再用 二次蒸馏水定容，配成1．0X 0．1mol·L_1 NaCl)配成1．0×10-5mol·L～，4℃保存。 2．2实验方法 2．2．1 荧光猝灭光谱和同步荧光光谱 BSA 同步荧光光谱(激发狭缝均为5nm，发射狭缝均为3nm)。 2．2．2紫外一可见吸收光谱 混合溶液的紫外光谱。 2．2．3 圆二色谱(CD) 室温下，在一系列10mL比色管中，分别加入1．0mL 英池。木犀草素是在J一815CD仪上测试的，槲皮素是在MOS一450／AFCD仪上测试的。 3 结果与讨论 3．1荧光猝灭光谱 BSA因含有色氨酸、酪氨酸及苯丙氨酸等氨基酸残基而能发射较强的内源荧光。但是由于酪 不同浓度的木犀草素或槲皮素溶液存在下B