大鼠骨髓间充质干细胞体外培养及CMDiI标记的实验研究.pdfVIP

安徽医科大学学报摇 粤糟贼葬 哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽粤灶澡怎蚤摇 圆园员猿 允怎灶 源愿（远） ·远园苑 · 大鼠骨髓间充质干细胞体外培养及 悦酝鄄阅蚤陨标记的实验研究 员 员 员 员 圆 员 员 员 毛雨红 ，莫碧文 ，李劳冬 ，李摇 洁 ，王孝养 ，韦江红 ，黄剑伟 ，徐摇 青 摘要摇 目的摇 建立骨髓间充质干细胞（酝杂 泽）的体外分离纯 摇 摇 近年来，运用复合骨髓间充质干细胞（遭燥灶藻 化、扩增以及标记的方法，为后期体内实验提供依据。方法 皂葬则则燥憎 皂藻泽藻灶糟澡赠皂葬造 泽贼藻皂 糟藻造造泽，酝杂 泽）生物材料或 摇 采用全骨髓培养和差速贴壁法分离纯化 酝杂 泽，培养期间 者直接静脉注射促进骨、心肌和神经组织等修复引 观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞周期和表面标记物，成 ［员原猿］ 导再生已在很多动物模型上获得成功 ，但通过 脂成骨分化诱导鉴定。酝杂 泽 经氯甲基苯甲酰氨荧光染料 何种方法标记干细胞以便更全面有效地研究干细胞 （酝鄄阅蚤陨）标记后，荧光显微镜观察荧光标记情况，流式细胞 仪检测标记率，并通过绘制生长曲线明确 酝鄄阅蚤陨 对 酝杂 泽 是否归巢于靶器官仍然是一个研究重点和难点。氯 生长增殖的影响。结果摇 酝杂 泽接种圆源 耀源愿 澡后，贴壁细胞 甲基苯甲酰氨荧光染料（糟澡造燥则燥皂藻贼澡赠造鄄遭藻灶扎葬皂蚤凿燥凿蚤葬造鄄 多为圆形、多角形、梭形，传至第猿 代时形态呈均一的长梭 噪赠造 糟葬则遭燥糟赠葬灶蚤灶藻，酝鄄阅蚤陨）作为一种细胞膜荧光染 形。第 猿 代 酝杂 泽 高表达 阅源源，低表达 阅员园远，不表达 料，标记时间长，性质稳定，易操作，对细胞无毒害作 阅员员遭、阅源缘，愿缘豫以上细胞处于郧辕 郧 期；成脂成骨诱导分 园 员 用，且不受固定和包埋等影响，是免疫荧光、免疫组 别经油红韵和茜素红染色均呈阳性。 酝鄄阅蚤陨标记后荧光显 化原位杂交中理想的细胞荧光标记；将标记的细胞 微镜下细胞呈红色荧光，体外培养圆周荧光未见明显减弱； 流式细胞术检测显示标记率达怨缘豫以上，标记后细胞生长 注入体内，可以有效地显示移植细胞在活体组织中 增殖不受影响。结论摇 通过全骨髓贴壁法及其扩增后可获 的迁移和分化。笔者应用全骨髓贴壁培养法获得纯 得大量纯度较高的间充质干细胞，酝鄄阅蚤陨标记是一种简单、 度较高的酝杂 泽，观察其生物学特性，并对 酝鄄阅蚤陨体 稳定、无毒的细胞标记方法。 外标记酝杂 泽进行动态观察，为后期体内移植示踪 关键词摇 骨髓间充质干细胞；原代培养；酝鄄阅蚤陨；细胞标记 研究提供依据。 中图分类号摇 砸源缘苑援苑 文献标志码 粤 文章编号 员园园园原员源怨圆（圆园员猿）园远原园远园苑原园缘 员摇 材料与方法 员援员摇 材料摇 圆园员圆原员圆原员苑接收 基金项目：国家自然科学基金（编号：猿园苑远园园愿猿）；广西自然科学基金 员援员援员摇 实验动物摇 健康杂孕云级杂阅大鼠，雄性，圆 耀 重点课题（编号：圆园员圆郧载晕杂云阅粤园缘猿园圆园）；广西科学研究与 源周龄，缘园耀员园园 早，由桂林医学院杂孕云级实验动物中 技术开发计划课题（编号：园苑员怨园园远 原圆 原愿）；广西卫生厅 心提供。 重点课题（编号：圆园园苑猿圆