液相核酸芯片鉴定角膜常见致病真菌的初步实验研究.pdfVIP

·110· ·论著． 液相核酸芯片鉴定角膜常见致病真菌的 初步实验研究 董燕玲谢立信银红梅孙士营黄海南 【摘要】 目的探讨建立快速鉴定角膜常见致病真菌的液相核酸芯片检测系统及其应用于真 菌性角膜炎临床快速诊断的可行性。方法实验研究。设计针对5种角膜常见致病真菌(茄病镰刀 菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌、烟曲霉菌及黄曲霉菌)rRNA基因内转录间隔(ITS)区的种特异性探针， 57端氨基C12修饰后与不同荧光色的微球结合，建立液相核酸芯片检测系统。将目的真菌的5株标 准菌株和42株角膜分离保存菌株的基因组DNA以一对真菌通用引物扩增并标记后用于杂交检测。 实验中设立单一菌种检测与多菌种混合检测的比较，以及芯片检测与琼脂糖凝胶电泳检测的比较，采 用配对设计资料的t检验和Spearman等级相关分析对榆测结果进行统计学分析，进而评估该检测系 h 统的特异性、灵敏度和重复性。结果所建立的液相核酸芯片体系可在聚合酶链反应(PCR)后3 内准确将5株标准菌株鉴定至菌种的水平；42株角膜分离保存菌株单次检测阳性率达95．2％；阳性 信号与背景比值位于5．6—13．3之间；单一菌种检测和5种菌种平行检测的中位荧光强度(MFI)差 0．01)；最低检测浓度为0．94ngPCR产物，比琼脂糖凝胶电泳低40倍；4次重复检测的变异系数在 1．8％～13．7％之间。结论所建立的液相芯片检测系统具有较高的特异性、灵敏度及重复性，可同 时完成对5种角膜常见致病真菌的菌种检测，为液相芯片技术在临床真菌快速诊断中的应用奠定了 实验基础。f中华聪搴≯杂志，2009，45：110—114) 【关键词】寡核苷酸序列分析；角膜；真菌 ontheu∞ofDNA fortheidentificationofcorneal Preliminary smpemion study array pathogenic DONG Hai—rl皿rk‘TkState fungi Yah—ling’，XIELi—xin．YINHong-mei，sUNShi-ying，HUANG Key Cultivation Provincml Laboratory Base，ShandongKeyLaboratoryofOphthalmology，ShandongEyeInstitute， Qingdao266071，China sdCn Correspondingauthor：脚Li—xin。Entail：fixinxie@public．qd To a DNA forthe Objective 【Abstract】 developmultiplex，micmsphere-basedsuspensionarray ofcorneaand identificationof to the ofits inthe importantpathogenicfungi studyfeasibilityapplication clinical of keratitis．MethotisFusarium diagnosisfungal solani，fusariummoniliforme．fuIsarium and about of covered