HPLC-ELSD法测定缬氨酸样品中杂质氨基酸的含量.pdfVIP

第 40卷 第 6期 化 工 技 术 与 开 发 Vo1．40 No．6 2011年 6月 Technology DevelopmentofChemicalIndustry Jun．2011 HPLC—ELSD法测定缬氨酸样品中杂质氨基酸的含量 任洪发 (广东肇庆星湖生物科技股份有限公司，广东 肇庆 526070) 摘 要：建立了反相高效液相色谱一蒸发光散射检测法 (HPLC—ELSD)测定缬氨酸样品中杂质氨基酸含量 的方法 。采用 Hype~ilBDSC18色谱柱 (4．6x250mm，5lxm)，以0．1％三氟乙酸乙腈溶液一0．1％三氟乙酸水溶液 为流动相进行线性梯度洗脱 ，流速为 0．8mLm·in～，在漂移管温度 60℃，氮气流量 1．5Lm·in一的条件下 ，在 25min内完成缬氨酸样品中杂质氨基酸的分离测定。在线性范围内，各组分进样质量的常用对数值与峰面积 的常用对数值均呈 良好 的线性关系。精密度和重复性较好 ，样品的加样回收率为97．5％～98．0％。该方法检测速 度快、检测过程简单方便 、检测结果准确可信，可以作为缬氨酸样品中杂质氨基酸含量的检测方法 ，也为其他 原料药 中氨基酸的分析提供了参考。 关键词 ：反相高效液相色谱 ；蒸发光散射检测；氨基酸；缬氨酸 中图分类号 ：O657．31 文献标识码：A 文章编号：1671．9905(2Ol1)06一oo38．03 L一缬氨酸含有 5个碳原子 ，支链结构 。属于 进行检测 。该方法快速 、简便 ，分离效果好 ，适用 中性氨基酸，是人体必需氨基酸之一。它的用途 于缬氨酸试验研究中杂质氨基酸的快速检测。 广泛 ，在医药工业，作为营养增补剂，主要用以配 1 实验部分 制复合氨基酸输液 、合成多肽药物和食品抗氧化 剂等，在食品工业 ．可用作食品添加剂、营养增补 1．1 仪器及试剂 液及风味剂等。在饲料工业 ，用于猪饲料 中，对母 Agilent1200高效液相色谱仪 ．蒸发光散射检 猪乳腺组织分泌乳汁有重要的促进作用 。另外 ， 测器 (ELSD)3300，ME215S型电子天平 ，。 以缬氨酸为原料可 以合成缬更昔洛韦、缬沙坦等 缬氨酸 (Va1)、丙氨酸 (Ala)、亮氨酸 (Leu)、三 原料药。缬氨酸的生产主要采用生物发酵法 ，副 氟乙酸 (TFA)、乙腈 (色谱纯)、缬氨酸供试样品。 生的杂质氨基酸比较多，并且杂质氨基酸结构与 1．2 标准品混合溶液和供试品溶液的制备 缬氨酸相近 ，难 以除去。因此，在缬氨酸的菌种选 分别精密称取丙氨酸、缬氨酸和亮氨酸标准 育、发酵调节、提取精制等试验研究n 的过程 中。 品各约 25mg，置于 100mL容量瓶 中，加水溶解 ， 需要对缬氨酸样品中杂质氨基酸的含量进行监 稀释定容，配制成标准品混合液。 控 。研究一种快速、简便、高效的检测杂质氨基酸 精密称取缬氨酸供试样 品约 100mg．置于 含量的方法具有重要 的意义 。 100mL容量瓶 中，加水溶解 ，稀释定容 ，配制成供 目前，氨基酸的分析方法主要有柱后衍生离 试样 品溶液 。 子交换色谱法、柱前衍生高效液相色谱法和离子 1．3 色谱条件 色谱法 [4]。衍生法操作繁杂，衍生试剂 昂贵 。离子 色谱柱 HypersilBDSC184．6x250mm，5 m。 色谱法仪器成本高。试验研究 中样 品成分复杂 ． 流动相 ：(A)0．1％三氟 乙酸 乙腈溶液 ；(B)O．1％三 检测频率高 ，需要开发低成本、高效率的检测方 氟乙酸水