气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立.pdfVIP

第 3O卷 第6期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．3O No．6 2011年 12月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Dec．2011，759~ 763 气单胞菌和嗜水气单胞菌双重 PCR检测方法的建立 潘晓艺 沈锦玉 郝贵杰 姚嘉簧 徐 洋 尹文林 孙逢明 吴颖蕾 1．中国水产科学研究院鱼类健康与免疫重点实验室／浙江省淡水水产研究所，湖州 313001； 2．浙江省富阳市水产技术服务站，杭州 311400 摘要 针对 GenBank中登录的气单胞菌属 (Aeromonas)的毒力基 因甘油磷脂胆固醇酰基转移酶基 因 (GCA丁)和嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)的 16SrRNA基因的保守区设计 2对特异性引物。通过进行 双重 PCR反应体系优化，PCR产物的测序鉴定和特异性试验 ，建立了一种能同时检测气单胞菌 (Aeromonas spp．)和嗜水气单胞菌的双重PCR检测方法。用此方法对 5株嗜水气单胞菌、7株其他不同种的气单胞菌和5 株非气单胞菌属菌株进行双重PCR检测。结果显示，气单胞菌和嗜水气单胞菌在GCAT基因的扩增区都能得 到有效扩增，其中嗜水气单胞菌能同时在 16SrRNA基因扩增区得到有效扩增，而非气单胞菌属的菌株，在此两 扩增区都为阴性 ，表明此检测方法可靠且可行。 关键词 气单胞菌；嗜水气单胞菌；16SrRNA；GCAT基因；双重PCR 中图分类号 Q786；S941．42 文献标识码 A 文章编号 1000—2421(2011)06—0759—05 气单胞菌属(Aeromonas)细菌是常见的腐物寄 1 材料与方法 生菌，在 自然界分布很广，水和土壤中都有存在，在 健康人的粪便中偶尔可以分离出，嗜水气单胞菌 1．1 菌株来源 (Aeromonashydrophila)是该属的代表种。由气 17株菌株，其中5株嗜水气单胞菌、7株其他种 单胞菌引起的水产养殖动物疾病种类繁多，如鲢鳙 的气单胞菌和 5株非气单胞菌属菌株，具体情况如 腐皮病、草鱼肠道 出血症、异育银鲫溶血性腹水病、 表 1。非标准菌株为笔者所在实验室分离所得，标 鲤红斑病和竖鳞病、鳗赤鳍病和鳖穿孔病等L1]。这 准菌株都购 自美 国标准生物品收藏 中心(ATCC)。 些疾病的发生不仅给水产养殖业带来严重的经济损 表 1 菌株列表 失，还可通过水产动物和水产品感染人畜，导致人畜 Table1 Strainsusedinthisstudy 腹泻和食物中毒，影响人类健康L5]。特别是该菌属 菌株 Strains 来源 Resources 宿主 Hosts A．hydrophilaAI℃c7966 AroC M 1k 中的嗜水气单胞菌，是多种水产动物的主要致病菌， A．hydrophilaBsI(-1O Theauthors Cruciancarp 也是人一畜一水产动物共患病病原菌_7]。因此，气单 A．hydrophilaTP 30 Theauthors Bream A．hydrophilaP])I 711 Theauthors Bream 胞菌特别是嗜水气单胞菌已引起水产界、医学界和 A．hydrophilaBJK0805 Theauthors Crudancarp 兽医学界的高度重视。传统的细菌鉴定方法主要是 A．sobriaArCc43979 A