葡萄叶片中提取总RNA的三种方法比较.pdfVIP

北方园艺2o13(02)：87～9o ·生物技术 · 葡萄叶片中提取总RNA的三种方法比较 杨 晓 燕 ，张 波 ，黄 方 爱 ，颜 欢 ，李 月 荣 (1．石河子大学 药学院，新疆 石河子 832002；2．省部共建新疆特种资源植物药重点实验室，新疆 石河子 832000) 摘 要：采用试剂盒法、热酚法和LiCl沉淀法3种方法提取葡萄叶片总RNA，通过琼脂糖凝 胶电泳和Agilent2100计检测总RNA的完整性和提取纯度。对红地球葡萄叶片总RNA提取方 法做比较，以得到完整的、高质量的葡萄RNA。结果表明：LiCl沉淀法提取的RNA收率高，完整 性好，OD2。／0D28。均在 1．80～2．O0，纯度高，28S、18S条带清晰完整。可以满足后续分子生物学的 研 究。 关键词：红地球葡萄叶片；总 RNA；LiC1沉淀法；提取方法 中图分类号：S663．1 文献标识码：A 文章编号：i001--0009(2013)02--0087--04 RNA是基因表达过程 中非常重要的生物分子，如 的研究中，需要使用葡萄叶提取高质量RNA。虽然曾有 mRNA，它携带了DNA的全部编码信息。RNA的分离 提取葡萄各组织RNA的方法报道 “]，但在实际操作过 是研究基因功能的重要基础之一，在分子生物学中占有 程中，次生代谢产物一直是 RNA测序分析研究中的障 重要的地位。植物细胞 内的RNA主要是 rRNA(占 碍 1【引。葡萄叶片多糖多酚物质含量较高，由于其一些理 8O ～85 )、tRNA及小分子 RNA(占10 ～15 )和 化性质与RNA相似，所以在去除多糖多酚操作的同时 mRNA(占196／～5 )。rRNA含量最丰富，由25S、18S RNA也容易被裹带走，很难将它们分开，造成 RNA产 和5S组成。一般情况下 ，提取的总 RNA也可用于构建 量的减少。在沉淀 RNA时也容 易产生含有 多糖 的 cDNA文库 ，或通过Northernblot及 RT—PCR分析基 因 RNA凝胶状沉淀，这种 RNA沉淀难溶于水 ，或溶解后 表达情况 ，还可用于基因表达谱分析。近年来发展的高 产生粘稠状的溶液，不利于后续试验操作。此外，多糖 通量测序技术和高性能的生物信息分析技术对于RNA 还可以抑制许多酶的活性；因此，污染了多糖的RNA样 的质量要求极高，这使得 RNA提取在完整性和纯度方 品无法用于进一步的分子生物学研究[1H]。多酚类物 面有了更高的要求。RNA提取一般使用蛋白质强变性 质是葡萄等植物优势的次生代谢产物，它很容易被氧化 剂有效抑制 RNA酶活性，同时使 DNA变性 ，再通过有 成褐色的醌类物质，而醌类物质与 RNA不可逆的结合 ， 机溶剂反复抽提去掉蛋白质、多糖等物质 ，在 RNA沉淀 同样抑制了RNA 的活性[】。因此 ，含有多糖多酚的 剂的作用下，针对性分离 出RNA。由于 RNA酶活性 RNA样品很难满足进一步分子生物学研究的需要。为 强，故要得到无降解 RNA难度 比较大。尤其是植物细 此，该试验试图通过比较试剂盒法、热酚法和LiC1沉淀 胞具有坚硬的细胞壁，细胞 内有较大的液泡及 内含物， 法的提取效果，以期找到一种适合于葡萄叶片RNA提 以及与核酸极性接近的多糖、多酚及其它次生代谢物， 取的最优方法。 使得植物材料 RNA的提取难度高于动物材料。 1 材料与方法 目前适用于植物材料 RNA提取的方法有多种 ，其 1．1 试验材料 中异硫氰