思茅松毛虫2龄幼虫肠道好氧细菌的筛选及毒力测定.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiAgr1．Sci．2011，39(28)：17288—17290 责任编辑 乔利利 责任校对 况玲玲 思茅松毛虫2龄幼虫肠道好氧细菌的筛选及毒力测定 张武先，王金华 ，熊智，孙佑赫，李彪，赵丽芳，王海林 (西南林业大学，西南山地森林资源保育与利用省部共建教育部重点实验室，云南昆明650224) 摘要 [目的]筛选思茅松毛虫(Dendrolimu．kikuchiiMatsumura)2龄幼虫肠道好氧细茵并测定其毒力。[方法】将思茅松毛虫2龄幼虫中 肠样品倍比稀释后涂布平板分离菌株，共分离得到5株好氧细茵。以细菌基 因组DNA为模板，用细茵 16SrDNA通用引物 (27f和 1492r)对模板扩增，并用4种限制性 内切酶HoeⅢ和Hindm、Hinfl和z IX~PCR扩增产物进行ARDRA多态性分析。[结果]聚类图谱 分析发现，5株好氧细菌在95％的相似水平上聚成 2个不同分类操作单元(OTU)，表明思茅松毛虫2龄幼虫肠道内好氧细菌的遗传多 样性水平偏低。室内毒力试验表明，肠道细茵杀虫死亡高峰期在4～10d，菌株4杀虫效果最佳，12d时校正死亡率达到53．57％。[结 论1为防治思茅松毛虫提供了参考。 关键词 思茅松毛虫；肠道细菌；多样性；毒力 中图分类号 $433．4 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2011)28—17288—03 ScreeningandToxicityDeterminationofIntestinalAerobicBacteriafrom 2 instarLarva ofDendrolimu．kikuchff ZHANGWu-xianetal (KeyLaboratoryforForestResourcesConservationandUseintheSouthwestMountainsofChinaMinistrvofEduca． tion．SouthwestForestry university，Kunming，Yuuuao650224) Abstract 10biectivelThepaperwastoscreenintestinalaerobicbacteriafrom2。instarlarvaofDendrolimu．kikuchiianddetermineitstoxic． ity．fMethodITheintestinalsamplesof2 instarlarvaofD．kikuchiiwasdilutedin2一foldandcoatedonplatestoisolatestrains．andatotalof 5strainsofaerobicbacteriawereisolated．WithbacterialgenomicDNA astemplate．theuniversalprimers ofbacterial16SrDNA (27fand 1492r)wasusedtoamplifythetemplate，4restrictionenzymesHoe m andHindIII，H／nfIandTaq1wereusedtocarryoutARDRApolymor- phism analysisonPCR products．IResuhlClustermapanalysisshowedthat5strainsofaerobicbacteriaclusteredintotwodifferenttaxonomic operatingunits(OTU)on95％ similaritylevel，thisindicatedthatthegeneticdiversitylevelofintestinalaerobicbacteriarfom2 instarlarva 0fD．kikuchiiwasrelativelylow．Theindoortoxicitytestshowedthatthedeathpeaksofinsectskilledbyintestinalbacteriawereduring4—1O d．theinsecticideeffectofstrain4wasthebestwithcorrectedmortalityof53．57％ at12d．1ConclusionlThepaperprovidedreferencefor controlofD．kikuchii． Keywords Dendrolimu．kikuchii：Intestinal aer