甘薯质体中的乙酰辅酶A羧化酶亚基基因accD的克隆与序列分析.pdfVIP

植物生理学通讯 第45卷 第 11期，2009年 11月 1065 甘薯质体中的乙酰辅酶A羧化酶亚基基因accD的克隆与序列分析 王玉华 ，郝建国，贾敬芬 西北大学生命科学学院，陕西省生物技术重点实验室，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安 710069 提要：依据烟草质体全基因组序列设计引物，以甘薯质体基因组DNA为模板，PCR扩增包含质体accD基 因完整编码区在 内的一段序列(GenBank登录号为GQ395771)。序列分析表明：该片段全长为2209bp，包括l548bp的accD基因编码序列， 推测编码515个氨基酸的蛋白质，该蛋白序列具有异质型p—CT中保守的锌指结构和c末端5个基元。同时绘制了该DNA 片段的限制性酶切图谱。相似性比较显示，甘薯accD基因与大豆、马铃薯、拟南芥、人参、莴苣、葡萄、海岛棉、甘蓝、 辣椒、菠菜、番茄和烟草的accD基因核苷酸相似性为72％一87％，氨基酸相似性为58％~83％。 关键词：甘薯；乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)；accD基因；克隆 CloningandSequenceAnalysesofPlastid-EncodedAcetyl-CoA Carboxylase SubunitGeneaccDofSweetPotato[Ipomoeabatatas(L．)Lam．】 WANG Yu—Hua，HAOJian—Guo，JIA Jing—Fen CollegeofLlyeSciences，NorthwestUniversity,ShaanxiProvincialKeyLaboratoryofBiotechnology,KeyLaboratoryofResource BiologyandBiotechnologyinWesternChina，MinistryofEducation，Xi’an710069,China Abstract：ThefragmentcontainingplastidaccDgene(GenBankaccessionnumber：GQ395771)encodingthe carboxyltransferaseBsubunitofacetyl—CoAcarboxylase(ACCase)wasclonedfromplastidgenomeDNAin sweetpotato(Ipomoeabatatas)．SequencinganalysisindicatedthatsweetpotatoaccDiS2209bDwithan1548 bpopenreadingrfame(ORF)，encodinga515一amino—acidpolypeptidewhichcontainedthezincfingerstructure andtheC—terminalregionswithfivemotifs．TherestrictionmapofthisclonedfragmentwasalSOestablished． TheBLASTresultsshowedthatthehomologiesofthisgenewiht soybearl，potato，tobacco，Arabidopsisthaliana， ginseng，lettuce，grape，sea—islandcotton，cabbage，pepper，spinach，tomatoandtobaccowerefrom 72％ to 87％．andthesimilaritiesoftheaminoacidsequenceswererfom 58％ to83％． Keywords：sweetpotato(Ipomoeabatatas)；acety1一CoAcarboxylase(ACCase)；accDgene；cloning 作为脂肪酸生物合成关键酶的乙酰辅酶A羧 去除导肽，最后与质体基因编码的B．CT亚基组装 化酶(acetyl—CoAcarboxylase，ACCase)是碳流进入 成ACCase复合体(Reverdatto等 1999；Ke等2000)。 脂肪酸合成途径的调控点(Slabas和 Fawcett1992； 有研究表 明，质体基因组编码 B—CT亚基是 Ramli等2002；王伏林等 2006；崔燕等2008)。在 ACCase活性发挥的限制因子，质体accD基因的超 植物体内有位于质体的异质型和位于胞质溶胶中