2009年江苏省伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳基因分型分析.pdfVIP

江苏卫生保健2010年 11月第 l2卷第6期 【疾病控制】 2009年江苏省伤寒沙门菌脉冲场凝胶 电泳基因分型分析 董晨 庄菱 钱慧敏 周璐 谈忠鸣 鲍倡俊 汤奋扬 (江苏省疾病预防控制中心，江苏南京 210009) 【摘 要】 目的：对江苏省2009年分离出的伤寒沙门茵进行同源性分析。方法：用生化和血清 学方法，对江苏省2009年从肠道传染病患者中分离到的伤寒沙门菌进行鉴定。伤寒沙门茵基因 组经限制性内切酶XbaI酶切后，采用脉冲场电泳获得电泳图谱，再利用BioNumerics软件对电泳 图谱进行同源性分析。结果：共从江苏省9个地区分离得到39株伤寒沙门茵，BioNumerics分析 结果显示，共有31个不同的PFGE带型出现，除5株以外，其余34株分布于8个相似性在85％ 以上的簇 内。结论：江苏省2009年可能存在8个主要的伤寒沙门茵克隆，这些克隆传播可能是 同期伤寒流行的主要病原。PFGE指纹图谱为伤寒沙门茵分子分型网络监测打下了良好的基 础，为疾病主动监测和传染来源追踪提供了技术支持。 【关键词】 伤寒沙门茵；脉冲场电泳；分子分型 【中图分类号】 R183．4 【文献标识码】 B 【文章编号】 1008—7338(2010)06—0011-02 为了解江苏省伤寒沙门菌分子流行病学特征，应 均法 (UPGMA)；电泳分析采用 Bandbased／Dice方 用脉 冲场 电泳法 (pulsed—fieldgelelectrophoresis， 法计算聚类相似性系数，即Dice系数(FX100％， PFGE)，对江苏省2009年分离的伤寒沙门菌进行基 Fvaluc×100％)来衡量PFGE带型之间的相似度。根 因分型分析，现报告如下。 据Tenover和Talon等[2-3]解释，相似性≥85％被认为 1 材料与方法 是来 自同一克隆株。 1．1 菌株来源 菌株来 自江苏省2009年9个地级 2 结果与分析 市(南京、盐城、泰州、无锡、苏州、淮安、常州、南通、扬 2．1 脉冲场凝胶 电泳 39株伤寒沙门菌用限制性 州)，共 39株，均为从肠道传染病患者中分离。PFGE 内切酶XbaI酶切后进行 PFGE电泳，可得出不同的 分析用分子量标准的参考菌株——沙门菌H9812为 PFGE图谱，每株约产生 14—19条电泳带，酶切片段 全国病原细菌实验室监测网络PluseNetChina中的标 分子量在2O一600kb间。见图1。 准菌株。 2．2 聚类分析 用 BioNumeries软件分析发现，39 1．2 试剂和溶液 蛋 白酶K(AMRESCO公司)，限 株伤寒沙门菌有31种不同的PFGE型。以PN表示， 制性内切 酶 XbaI(大连宝生物工程有 限公司)， P代表PFGE型，N代表图2中PFGE型的位置，各种 SeaKemGold琼脂糖 (CambraexBioScienceRockland PFGE型代表DNA片段数 目和大小一致的电泳图谱。 公司)；EDTA、Iris、硼酸 (上海生工生物工程技术服 其中P22型有5株，Pl、P5和 P18各有2株，其余各 务技术有限公 司)；十二烷基肌氨酸钠 (SIGMA公 PFGE型包括 1株。所有 39株伤寒沙门菌的相似性 司)；其他相关试剂均为分析纯。 都在48．6％～100％之间，其中34株分布于8个相似 1．3 主要仪器 脉冲场凝胶电泳仪为CHEF—DRIll 性在85％以上的簇内。 system (Bio—Rad)；凝胶成像系统为 GELDoc2000 每个簇使用x85N表示，x代表XbaI酶切，85代 (Bio—Rad)；浊度仪为Densimat(BioMerieuxFrance)o 表相似性为85％，N代表在图2聚类分析结果中簇的 1．4 PFGE实验方法 实验操作方法按照美 国 顺序。分析可见，39株菌中有 34株可能来