H1亚型猪流感病毒HA基因DNA疫苗的构建及其对Balb／c小鼠的免疫效果评价.pdfVIP

中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2009，29(10)：38～43 HI亚型猪流感病毒 HA基 因DNA疫苗的构建及其 对 Balb／c小鼠的免疫效果评价 刘春国 刘 明h 李洪涛 杜金玲 张新涛 石薇琳 (1中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术 家重点实验室 农业部动物流感叶1心及国家禽流感参考实验室 哈尔滨 150001) (2东北农业大学动物医学院 哈尔滨 150030) 摘要 以A／swine／Guangd0ng／LM／2004(H1N1)猪流感病毒HA基因为模板，通过 RT-PCR技术 扩增出HA基因，并将其克隆到pCI—neo真核表达载体 中，成功构建重组表达质粒 pCIH·A，瞬时转 染veroE6和293T细胞，通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immun0per0xidasemonolayerassay， IPMA)、间接免疫荧光试验 (indirectimmunofluorescenceassay，ilFA)和蛋 白免疫 印迹 (Western blot，WB)实验证明，HA基因能够在哺乳动物细胞中有效表达并具有 良好的生物学活性。将重组 质粒三次免疫8w雌性Balb／c小鼠后，ELISA试验和中和试验结果表 明该重组质粒能够诱导小鼠 产生较高的抗体滴度，并具有 良好的中和活性 。因此为H1亚型猪流感DNA疫苗的研究奠定了 理论基础 。 关键词 猪流感 Hl亚型 HA基 因 DNA疫苗 免疫保护 中图分类号 Q819 H1亚型猪流感 (swineinfluenza，SI)是由隶属于正 和蔓延中发挥_厂重要作用。H】N】亚型SI灭活疫苗主 黏病 毒科 A 型流感 病 毒属 的猪流 感病 毒 (swine 要依靠产生抗HA抗体而提供保护，然而HA基因变异 influenzavirus，SIV)引起的猪呼吸道 、生殖道 以及免疫 频繁，使得疫苗株不能够对流行株产生有效的保护，另 抑制疾病，是 目前危害全世界养猪业的重要呼吸道疾 外 由于灭活疫苗存在免疫剂量大、免疫期短及毒副作 病之一。Hl亚型流感在 1918年就已经发生，然而第一 用大等诸多问题导致免疫失败常有发生 。研究发 株 HlN1亚型 SIVA／Swine／Iowa／15／31(H1N1)于 现类型不同的疫苗在预防流感时有相互补充的免疫加 1931年才被分离并鉴定出来 。回顾人类流感史，20 强作用。鉴于灭活疫苗本身存在有缺点，而所以通过 世纪每次人类流感大流行的前后都有 SI的发生和流 研究各种疫苗的优缺点，取长补短，可实现免疫效果 行。近来报道 1918年 “西班牙流感”大流行的 H1N1 的最佳化。核酸疫苗由于其既能够诱导体液免疫反应 毒株与古典型H1NISIV在基因和抗原方面极为相似； 又能诱导细胞免疫反应 ，因此得到 了广泛 的研究。因 1976年美国一名士兵因感染猪源H1N1流感病毒而死 为抗HA抗体在 sI防制中起着极为显著的作用，本试 于肺炎的事件证实了在 自然条件下SIV可从猪传播给 验构建含有 H1亚型 SIVHA基因的重组真核表达质 人，并能使与猪接触的人员产生急性、致死性呼吸道疾 粒，通过免疫小鼠评价其作为DNA疫苗的应用前景。 病，此次事件也赋予了SIV全新的兽医及人类公共卫 1 材料与方法 生意义。因此对 sI的监测和预防已引起世界各国的普 遍关注。对于猪流感并没有真正的治疗方法，但是及 1．1 材 料 时进行免疫接种能够提供有效保护 ]。目前，sI的防 1．1．1 病毒、菌株、细胞与载体 A／Swine／Guangd0n 制多采用灭活疫苗进行预防接种，并在控制 SI的发生 LM／2004(H1N1)猪流感病毒株 由本实验室分离鉴定保 收稿 日期：2009-0216 修凹日期：2009-07-01 存 ；大肠杆菌感受态细胞Topl0、VetoE6和293T细 通讯作者，电子信箱：liming(M@126．CO