一起手足口病暴发疫情的PCR检测分析.pdfVIP

2700 中国卫生检验杂志2009年 11月 第 19卷 第 11期 ChineseJournalofHe,dthLaboratoryTechn。logyN。v2009；v。119 N。ll ， 【暴发流行事例检测】 一 起手足口病暴发疫情的PCR检测分析 史红 ，罗军德 ，许静 (兰州市疾病预防控制中心 ，兰州 730030) [摘要】 目的：为查明某托幼机构发生的一起暴发疫情的病原菌 ，为预防和控制疫情传播蔓延提供有效策略。方法：采 集咽拭子标本，参照中国疾控中心 《手足ISl病实验室检测方案 (附件3)》对送检样品进行RT—PCR鉴定。结果：从 6份 病人标本中检出2份CoxA16病毒，检出率33．3％。结论：根据流行病学调查，临床表现，实验室检查结果，本起暴发疫情 由CoxA16病毒所致 ，在幼儿机构发生，传染性强，应引起关注并积极采取应对措施。 [关键词] 手足口病；暴发；PCR检测 [中图分类号] R446．5 [文献标识码] B [文章编号] 1004—8685(2009)11—2700—02 2009年6月3日接某医院报告疑似手足31病例，经调查6 (2)PCR反应体系的配制：5 RT—PCRBuffer，5．0¨J； 名症状相似的儿童属市内某托幼机构的中班和小班，年龄在 3 10m Mixture，1．0uJ；RT—PCR EnzymeMix，1．0Ixl；RNaseIn— ～ 4岁。6名儿童的临床表现有一人发热，多数有流涕、咳嗽， hibit，0．1 ；上游引物，0．5Ixl；下游引物，0．5Ixl；RNaseFree 偶有恶心、呕吐；手足均有皮疹 ，口腔有疱疹，两人皮疹还出现 W ater，11．9wl；Total，20 。 在臂、臀部位。疾控人员立即采取标本送至实验室检测，现对 (3)实验设计：在PCR记录纸 (实验记录纸)上记录本次 结果进行报告分析。 实验操作者姓名，实验 日期，所鉴定标本的名称以及标本的顺 序，与PCR仪排列的顺序一致。标记好加标本和对照的 PCR 1 材料与方法 管；阳性对照：EV71，CoxAl6的阳性标本；阴性对照：用无酶水 1．1 采集病人的咽拭子标本 代替标本。 专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位， 2．3 RT—PCR扩增 应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有3—5ml保存液的采样 在冰面上融化标本和各种PCR试剂；按需要配好体系，分 管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封 ，以防干燥 装至小管，每管加 5 模板(即提取出的RNA)，简短离心，放 立即(12h内)送达实验室，一20℃以下低温冷冻保藏。 人PCR仪进行 RT—PCR扩增，反应程序 ：60℃作用 1rain； 1．2 试剂与方 法 42℃作用 10s；50℃作用 30s；95oC作用 15s；94℃变性 30S； TIANampRNAKitforvirusdetection(离心柱型 目录号： 50~C退火30s；72℃延伸 1min；回到第5步，34个循环；72oC SDIO1)，QIAGENonestepRt—PCRKit(Cat：No．210212)。方 作用 10min；4℃保存待用。 法：逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)。