丹参酚酸B盐对大鼠肾纤维化的影响.pdfVIP

. . 第 卷第 期 州 中药杂志, 年 月 丹参酚酸 盐对大鼠肾纤维化的影响 周娟 ,张悦 ,陆海英 ,刘煜敏 ,林敏.上海中医药大学科技实验中心,上海 ; .上海中医药大学护理学院,上海 摘要 目的:观察丹参酚酸 盐 ? 对单侧输尿管梗阻大鼠肾问质纤维化的影响。方法:将雄性 大鼠随机分为 假手术组 只 、模型组 只 和治疗组 只 。模型组大鼠行单侧输尿管结扎 建立肾小管问质纤维化模型。治 疗组在基础上给予 ? 水溶液 . 灌胃,各组于造模后第 , 天分 批处死。用苏木精一伊红染 色观察肾组织病理学改变,用免疫组织化学方法观察 平滑肌肌动蛋白 ?的表达,用逆转录一多聚酶链反应? 方法检测肾组织中角蛋白 的表达。结果: ? 能够显著改善梗阻侧肾脏的病理改变,显著减少肾组织 的表 达,增加角蛋白的表达。结论: ? 可明显改善所致的大鼠肾问质纤维化,其作用可能是通过阻止小管上皮一成肌纤维 细胞转分化和抑制成肌纤维细胞的增生和活化而实现的。 关键词 丹参酚酸 盐;肾问质纤维化;小管上皮一成肌纤维细胞转分化 肾问质纤维化 ,白引物由 设计,由 公司 合成。 是慢性肾脏疾病进展至后期的组织学改变,其病 理特征主要是细胞外基质, . 动物 雄性 大鼠 只, 级, 周龄,体 沉积。成肌纤维细胞 , 重 ±,由上海西普尔.必凯实验动物有限 是合成的主要细胞,其特征是表达 平滑肌 公司提供,动物合格证号 沪 ?。 肌动蛋白 , 一 ,主要 方法 . 动物模型制备 动物麻醉后,左侧腰背部 来自活化的问质成纤维细胞和小管上皮细胞.成肌 局部剃毛,常规消毒铺巾,选择左侧腹纵形切【 , 纤维细胞转分化. ? 一 次切开皮肤至腹腔,游离输尿管,将左侧输尿, 。本研究观察了丹参中提取 管用组织钳托起中段, ~ 号丝线分别结扎输尿 的重要水溶性成分 ? 对单侧输尿管结扎? 管,两结扎线相距 ,不剪断输尿管,逐层缝, 大鼠肾间质纤维 合腹壁切口。假手术组开腹后不结扎输尿管,直 化的影响,并初步探讨其作用机制,为其临床应用 接缝合腹壁。 提供理论依据。 . 分组与给药 大鼠被随机分为假手术组、模型 材料 组, ? 治疗组,每组 只。造模后第 天开始灌 . 药物与试剂. 粉末,纯度 %,由上海 胃给药, 。 水溶液 .? ~,用时临时配制, 中医药大学附属曙光医院肝病所馈赠;小鼠单克隆 按 .? 体重给大鼠灌胃。假手术组和模 抗体?为 公司产品;二步法免 型组给以等体积生理盐水灌胃。造模后第 , 天 疫组化检测试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公 分 批处死大鼠,每次 只。 司;显色试剂盒购自华美生物工程公司;角蛋 . 肾组织病理检查 取左侧部分肾组织 %福 尔马林固定液固定,常规石蜡包埋,切片 。 收稿日期 梗阻侧肾组织行苏木精一伊红染色,普通光镜观察肾 基金项目 国家自然科学基金项目;上海市高等学校 问质纤维化情况。其余肾组织置一 ℃冰箱保存。 科学技术发展基金项目 ;上海市教育委员会重点学科 第 . 免疫组织化学染色 二步 期 通信作者 张悦, : , . : ? 法:病理组织切片常规脱蜡至水; . %胃蛋白酶 .. ℃消化 ,再用柠檬酸缓冲液 .第 卷第 期 . . 年 月, 微波炉 ? ℃加热以修复抗原;加 % 。~轻微混匀, : 一甲醇封闭内源性过氧化物酶,室温封闭 离心 ~ 。 孵育,短暂离心混匀。加;冲洗, %牛血清白蛋白溶液封闭 反转录酶,;加入第一抗体 ? : , ℃过夜;加 总体积 。轻微混匀,离心 ~ 孵育 辣根过氧化物酶标记的第二抗体, ℃孵育, 孵育 终止反应,迅速入冰,可短暂离;最后加入 一液显色;轻度核复染、 心混匀。反转录的 保存于一【 低温冰箱 脱水、透明、封片。每次染色均以代替第一 中,或立即用于。 抗体做对照试验,结果均为阴性。每组选择 个 反应体系: . ×不同动物来源的肾脏切片,染色后每张切片随机 .正向引物 终浓度 选择 个视野,所得图像用. .反向引物终浓度 .. 软件求阳性面积所占视野总面积的百分比,模板 终浓度 ., 把 个视野的阳性面积比平均值作为一张切片 反应体积为。轻微混匀,离心 ~ 。卢一 的值。的反应条件设定为 ℃预变性, ℃变 . 肾组织中角蛋白 的检测 性, ℃退火, ℃延伸,反应循 采用逆转录一多聚酶链反应? ,肾皮质总 环 次, ℃延伸 。 的反应条件设定为 提取,逆转录及反应均按照试剂盒说明℃预变性 , 变性,退火, 书进行。℃延伸,反应循环 次, ℃延伸。 肾组织总的抽提 按 试剂盒说明 程序结束后取产物 、 ,进行 %琼脂 书进行:取 ? 大鼠肾皮