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2 聚合物 PLGA-PEG-PLGA 的合成及表征 鉴于聚合物作为药物载体在医药中应用的优势,各种新型两亲共聚物被研究 合成,其中以 GA、LA和 PEG 为原料合成的 ABA型、BAB型及 AB型嵌段共聚 物被广泛研究(其中 A代表 PEG,B代表 PLGA)。PLGA和 PEG 是常见的医用、 药用材料,且均被食品及药物管理局(FDA)批准作为医用材料。PLGA段是疏水 的聚酯,可在体内降解为乳酸和羟基乙酸,参与人体代谢,被广泛用于药物缓释 胶囊材料、外科手术缝线、骨科内固定材料等。通过调节 GA与 LA的用料比例, 可以调节 PLAG 段的亲疏水性和降解速率。PEG 段具有亲水性,独特的生物相容 性,无毒性,无抗原性和免疫原性,常用于修饰疏水性药物,改变药物在体内的 分布。除此之外,这种类型的共聚物在水溶液中可自组装成为胶束,且具有温度 敏感性。 [11] 合成 PLGA-PEG-PLGA 的路线有两种 :缩合共聚法和开环聚合法。缩合共 聚法是用乳酸、羟基乙酸先行聚合生成低聚 PLGA,将其作为 B段,然后将 PLGA 与 PEG(A 段)按比例反应生成 PLGA-PEG-PLGA。此法简单,易操作,但得到 的共聚物产率低、热敏性小。开环聚合法则利用丙交酯、乙交酯和 PEG 按比例在 一定条件下聚合得到嵌段聚合物。该法需要先利用乳酸和羟基乙酸合成丙交酯和 乙交酯,成本高,操作复杂,但该方法产率高,聚合物理化性质理想,重现性好。 2.1 材料和仪器 2.1.1 材料 D, L-丙交酯、乙交酯(济南岱罡生物技术有限公司) PEG1000(天津天泰精细化学品有限公司) PEG1500(成都科龙化工试剂厂) 辛酸亚锡(美国 Sigma 试剂公司) 乙酸乙酯(重庆川东化工有限公司) 氯仿(重庆川东化工有限公司) 纯氮(重庆创亿气体有限公司,纯度:99.99%) 蒸馏水(minipore 纯水机) 2.1.2 仪器 603精密恒温油浴(重庆银河试验仪器有限公司) 高速搅拌器 D90-2F 杭州仪表电机厂 电热恒温水浴锅(北京长风仪器仪表公司) 4精密电子天平(上海恒平科学仪器有限公司) 冷冻干燥机(北京德天佑科技发展有限公司) 超声清洗机(无锡上佳生物科技有限公司) AVANCE-500 超导核磁共振仪(德国 BRUKER公司) 傅里叶变换红外光谱仪(PerkinElmer 公司) 接触角测量仪(台湾翰光高科技股份有限公司) 2.2 实验方法 2.2.1 PLGA-PEG-PLGA的制备 ① 丙交酯的纯化 重结晶法:将购买的丙交酯放入烧杯,加入体积大约是丙交酯体积 3 倍的乙 酸乙酯,水浴加热使丙交酯完全溶解,然后将丙交酯-乙酸乙酯溶液置于室温冷却 后,再放入冰箱继续冷却过夜。待丙交酯晶体析出停止后,抽滤、真空干燥,放 入干燥器,备用。重结晶 3次。因乙交酯购买保存时间短,无需纯化。 ② PLGA-PEG-PLGA的合成 [12] 开环聚合法 :在氮气保护下,将 PEG 加入三颈瓶中。160℃油浴,搅拌干 燥 2h。再加入丙交酯(5.673g)和乙交酯1.74g,继续搅拌 30min后,停止搅拌, 并加入 2滴辛酸亚锡,150℃氮气保护下反应 8h,得到粗产品。为考察不同组成对 聚合物性质的影响,设计两组样品,样品 A:PEG1000:PEG1500 为 1:1(质量 比),共 3g;样品 B:仅采用 PEG10003g。 2.2.2 PLGA-PEG-PLGA的纯化 将得到的粗产品加入蒸馏水,低温下搅拌待其充分溶解后,将聚合物水溶液 置 80℃水浴中使其完全沉淀,去除上清液中含有未反应的单体及低分子物质。溶 解-沉淀过程重复三次。将最后一次纯化得到的沉淀物冷冻干燥,于-20℃低温保存 备用。 2.3 表征 2.3.1 IR测定 将样品 A溶于氯仿,制备 15mg/mL样品氯仿溶液。取压制好的 KBr 片,分别 将氯仿及溶有样品的氯仿滴于 KBr 片上。红外灯下干燥后,前者作为空白片,在 Spectrum GX傅立叶红外光谱仪上测定样品的化学结构。 1 2.3.2 H-NMR测定 以氘代氯仿 CDCl 为溶剂,四甲基硅烷(TMS)为内标,室温下使用 3 AVANCE-500 超导核磁共振仪测定聚合物的化学结构。 52.3.3 分子量测定 [3] 利用核磁共振图谱,端基分析法计算聚合物的平均分子量(M ) 。 n 2.3.4 静态接触角测定 采用坐点(Sessile Drop)法测定水与样品的接触角。将材料溶于氯仿后在显 微镜载玻片上溶液浇注成膜,在室温下使氯仿挥发完全。将铺有材料薄膜的载玻 片固定在接触角测定仪的载玻台上,用精确度为 0.1?L 的微量注射器吸