中药鉴定中DNA分子遗传标记技术的应用与展望.pdfVIP

综 述 端龚摄立翻蔑颐麟翻理囊瀚霍擞热丁熬跟窦歌麒绷镌翼鑫篡于麟夔冀舞跳瓤撬熬巍(黝瑙幽塞礁活魏璐畏瀚豁轰熬 )勇嘿翼鑫璐照嘿嘿翁亥脚麟颐戮敬}嫩豁困翩姗幽麟盈撇薪势必皿翻举要瀚峨翅届aj翩幽国圈麟粼姗瀚田日脚麟敬臼翻翻麟娜幽幽圈..目困洲曰目 中药鉴定中DNA分子遗传标记技术的应用与展望 周文斌 ，‘刘萍2(1天津医科大学药学专业，天津，300070;2解放军总医院中药房，北京，100853 摘要 中药鉴定中应用的DNA分子遗传标记技术 (也称DNA分子遗传诊断技术)是利用任何生物种或个体都具有的特定 DNA多态性，通过直接诊断分析DNA的多态性，避开遗传特性表现过程中的环境因素、数量性状遗传或部分与完全显性的干 扰，快速准确地测定DNA的差异性。本文就近些年利用DNA分子遗传标记技术对中药进行鉴定的最新进展进行综述。 关键词 中药鉴定;DNA分子遗传标记技术;分子生药学 中图分类号:8282.5 文献标识码:A 文章编号:1672-8157(2006)01-0017-04 我国中药材种类繁多，资源丰富，据统计有1.2万 多态性，便能避开遗传特性表现过程中的环境因素、 余种，其中药用动植物占99%fII。现行使用的中药材许 数量性状遗传或部分与完全显性的干扰，快速准确地 多品种来源复杂、同名异物、同物异名、互混、互代现 鉴定药材真伪。DNA分子遗传标记技术已有20多种， 象屡有可见。而且近年来，由于经济利益的驱使，药材 有专家认为分为五大类比较合适1210 伪、混品种的数量有增无减。中药材的真伪优劣直接 1.1Southern杂交为基础的DNA分子标记技术 影响着中药的质量和疗效。为确保中药使用安全、有 限制性内切酶切片断长度多态性(Restriction 效，对各种药材进行准确地鉴定就显得十分重要。为 FragmentLengthPolymorphism,RFLP);单链构象多 此，人们做了大量的研究，建立了一些确实有效的评 态性RFLP (SingleStrandConformationPolymor- 价药材质量的方法，传统的鉴定方法有:基源鉴定、性 phism-RFLP,SSCP-RFLP)等。这一类技术的共同点是 状鉴定、显微鉴定、理化鉴定。然而，这些鉴定方法均 利用一种或几种限制性内切酶消化不同生物个体的 为生物体遗传表现性的鉴别，它们不仅受到遗传因素 DNA分子，再通过特异性的克隆或合成的探针进行分 的影响，而且与生长发育阶段、环境条件、人类活动 子杂交来揭示其DNA的多态性。 (如引种驯化、加工炮制等)有着密切关系，具有很大 1.2PCR为基础的分子标记技术 的变异性和可塑性。因而，传统生药鉴定难免存在主 随机扩增多态性DNA (RandomAmplifedPoly- 观性强、重现性差和稳定性低等缺点。因此，人们不断 morphicDNA,RAPD);标记位点测序 (Sequence 研究更完善、更准确、更具科学性的方法来解决药材 TaggedSite,STS);随机引物PCR (RandomPrimer- 鉴定问题。随着现代分子生物学技术的迅猛发展，分 PolymeraseChainReaction,RP-PCR);任意引物PCR 子生物学和基因工程技术日臻成熟，用DNA分子遗 (ArbitraryPrimer-PCR,AP-PCR);寡聚昔酸引物PCR 传标记技术对中药材进行鉴定具有不受环境因素、个 (OligoPrimer-PCR,OP-PCR)等。这一类技术的共同 体发育阶段及组织部位的影响，多态性强，准确率高 特点是利用合成的随机引物(常为5个一10个或更多个 等特点，展示了良好的应用前景。 寡聚核昔酸)，通过PCR扩增不同生物个体的DNA分 1DNA分子遗传标记技术简介 子，然后直接进行电泳分析来揭示其DNA的多态性。 目前在中药鉴定中应用的DNA分子遗传标记技