成年鸡原代肝细胞的原位分离和长期培养.pdfVIP

中 国兽 医学报 2009年9月 第29卷 第 9期 Chin ￡Sci Sep．2009 Vo1．29 No．9 1193 成年鸡原代肝细胞的原位分离和长期培养 刘开永 ，黄显会 ，高 海 。，贺利民 ，曾振灵 (1．华南农业大学 兽医学院，广东广州 510642；2．河南科技 大学 食品与生物工程学院，河南 洛阳 471003；3．山西农业大学 动物科技学 院，山西 太谷 030801) 摘要 ：为探讨成年鸡原代肝细胞 的分离条件和长期培养过程 中的形态学特征，本试验采用改进胶原酶二步原位灌 流法分离高活性鸡原代肝细胞 ，并优化培养液 ，得到肝细胞长期培养的初步条件 。结果显示 ，分离得到的活性肝细 胞达 94 ，培养 3d细胞活性最强；贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程 。 关键词 ：成年鸡 ；原代肝细胞 ；二步灌流法；贴壁培养 中图分类号 ：$852．167 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—4545(2009)09一l193—04 Insitu isolation andprimary long—term cultureofadultchicken hepatocytes IIU Kai—yong～，HUANG Xian—hui，GAO Hai’。。，HE Li—min ，ZENG Zhen—ling (1．College0f VeterinaryMedicine，South China AgriculturalUniversity，Guangzhou 510642，China；2．College ofFood andB0P”g” r g，Henan University of Scienceand Technology，Luoyang，Henan 471003，China；3．CollegeofAnimalScienceand Technology，ShanxiAgriculturalUniversity， Taigu，Shanxi030801，China) Abstract：To investigatetheseprarationmethodandmorphologicalchangesoflong—term cultureonprimarya— duh chickenhepatocytes，thechicken primaryhepatoeyteswereisolatedbytWO—step insitu collagenaseperfusion method，thecultureconditionwasoptimized，andtheprimarycompoudsofculturesolutionsweretried．Theresults showedtheviabilityfreshlyisolatedchickenhepatocytesreached94 ．Activityofthehepatocytewashighestatthe thirdday．Themorphologywereeffectivelymaintainedintheculturemedium．Theresearchprovidedinvitrochicken hepatotcytesexperimentalplatform fortheanimalhusbandryandveterinaryscience． Keywords：adultchicken；primaryhepatocytes；two—stepperfusionmethod；adherentculture * Correspondingauthor，E-mail：zlzeng@scau．edu．cn 利用原代肝细胞进行体外实验 ，与其他体外及 研究在胶原酶两步灌流法 的基础上加用 HEPES和 体内实验方法相 比，有 自身显著 的优点。原代肝细 提高灌流温度 ，并 以Williams’mediumE为基础培 胞模型是药效筛选、毒性筛选、药物代谢与生物转 养基 ，对原代肝细胞进行了长期培养，并动态观察其 化 、药物相互作用、药物致癌性检测 的理想模型，为