抗P-选择蛋白人源性单克隆抗体的制备.pdfVIP

生 物 技 术 通 讯 LETIERSIN BIOTECHNOLOGY Vo1．21No．6Nov．，2010 827 doi：10．3969~．issn．1009—0002．2010．06．018 研究报告 抗P一选择蛋白人源性单克隆抗体的制备 李鹤 一，王双 ，林建波 ，孙志伟 ，何建勇 1．军事 医学科学院 生物工程研 究所 ，北京 100071；2．沈 阳药科大学，辽宁 沈 阳 110016 [摘要] 目的：获得人源性抗P一选择蛋 白(selectin)特异性抗体 ，为相关疾病治疗奠定基础。方法 ：在 HEK293细胞 中真核分泌表达人P一选择蛋 白功能性片段 ，以此蛋 白片段作为抗原，利用本室构建的大容量全合成人源性噬菌体 抗体库进行筛选 ，经过 3轮 固相筛选后 ，阳性克隆得到富集 ；将其 中富集效果最好 的一株单链抗体 A1改造成全抗体 (IgG1)，重组质粒 转染 H293细胞后 ，抗体得 到表 达 ；表达后在全 抗体水平 上用ELISA和 Western印迹分别验证 了 A1抗体 的特异性，并通过非竞争 ELISA方法初步测定这株抗体 的亲和力。结果 ：3轮筛选得到 3株特异性噬菌体抗 体，其 中富集效果最好 的单链抗体 A1改造成全抗体形 式后特异性 良好，抗体亲和 力Kd=2x10 mol／L。结论 ：筛选得 到一株特异性较好的抗 P一选择蛋 白人源性单克隆抗体A1，其特异性和亲和力较好 ，有继续开发的价值。 [关键词] P一选择蛋白；真核表达 ；噬菌体抗体；筛选 ；特异性 ；亲和力 [中图分类号] R392．1；Q78 [文献标识码] A [文章编号] 1009—0002(2010)06—0827—07 ThePreparation ofHuman Anti-P-Selectin M onoclonalAntibodies ， WANGShuan~，LINJian-Bo，SUNZhi-Wei，HEJian-Yon~ 1．BeijingInsitituteofBiotechnology，Beijing100071； 2．Shenyang PharmaceuticalUniversity，Shenyang 110016；China [Abstract] Objective：Toobtainanti-humanP-selectinmonoclonalantibodies，andlayabasisforthetherapyof P-selectinrelated diseases．M ethods：P-selectin functionalsegmentwasexpressed secretly by HEK293 cells，which wasused asantigenforantibody panning．And then screeningfrom the largefully synthetichuman antibody library constructed in our lab， severalcandidates ofantibodies specially binding to P-selectin were obtained， after3 roundsofsolid panning，the positive cloneswere enriched．Next，one candidatesA1，which was enriched suffi— ciently，wastransferredfrom scFvtowholeantibody(IgG1)．Atlast，usingELISAandWesternblottoidenti~ the specificity ofA1．Alsousing non-competitive ELISA method to detectethe affinity ofA1．Results：Afterpanning， we got3 differentcandidates， and changed one