原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
维普资讯
1997年4月 西北大学学报(自然科学版) ADr．19目7
第27卷第2期 JournalofNorthwestUmverslty(NaturalScienceEdition) VoI．27Nv．2
ID]一』10,j)十固定化锌螯合物亲合色谱填料的合成
及其色谱行为 ‘
06 1
梁文忠 卫引茂V耿信笃
(西北大学现代分离科学研究所，710069，西安；第一作者26岁，男，硕士生)
摘 要 以大孔撖球硅胶为基质，用两种方法合成了高教锌离子警合枷亲合色谱填料。第一
种是将硅胶经y一缩甘油丙基三甲氧基硅烷活化后与亚氛基二乙酸键合；第二种是克将y_绾
甘油丙基三甲氧基硅烷与亚氛基二乙政反应，再键合到硅胶上。然后与锌离子警合，得到锌
离子警合物亲合色谱填料。对这两种填料的性质和色谱行为进行了研究。从对标准蛋白分
离的结果来看，以第二种合成路线为佳。
关键词 固定坐金属警合抽隶台色谱f亚氨基二乙酸；蛋白质
分类号∞ 臂警告拘 素言埂科 色谣
近年来固定化金属螯合物亲合色谱(ImmobilizedMetalChelateAffinityChromatography，IMAC)
在生物大分子分析中取得了广泛的应用。与其他亲合色谱填料相比，固定化金属螯合物亲合填料具有造
价低廉、配体金属离子易于更换、可供选择的洗脱条件多等优点。早期的填料合成是用琼脂糖
(Sepharose6B，SephadexG25)作为基质，在碱性环境中与IDA偶联后再与Cu”，Zn 等离子螯合，制
成软基质的亲合填料。但其桂效低，分析时间长，而且合成条件不适合硅胶基质。后来人们开始发展高
效金属螯合物亲合填料。Hashlmoto。’等以苯乙烯一二乙烯基苯聚合物TSKgelG5000PW为基质，制成
了TSKgelChelate5PW螯合树脂，螯合zn“离子后用于分离蛋白质混合物。后来Gimpel。’，Horvath
等在硅胶基质上合成了以IDA为整合基团的金属螯合物亲合填料。
本文以大孔微球硅胶为基质，用两种合成路线合成了两种IDA型亲合填料。再将其与Zn整合后
制成了IMAC固定相。在磷酸盐缓冲液中，对几种标准蛋白进行了分离。
1 实验部分
1．1仪 器
本文所用色谱仪为岛津LC一6A，SPD一6AV紫外可见检测器，SCL一6B系统控制器，Chemco一124A
型装桂机，KQ一250型超声仪。
1．2 试 剂
Vydae(7pm，30rim)大孔硅胶(美国Vydac公司)；
一 雅甘油丙基三甲氧基硅烷 (GLYMO ，河北省盖县化工厂)；
溶菌酶(Lys，鸡蛋白)、细胞色素-C(Cyt：C，单胞菌)、-乳球蛋白(Lact)、核糖核酸酵(RNase—
A)，均为美国Sigma公司产品。
亚氨基二乙酸 (IDA)为分析纯。
1．3 填料合成 ‘
1．3．1合成路线1硅胶的蕊处理及其活化：将8g大孔硅胶放入约8OmL1t1HCI(V／V)溶液中，
· 国家自拣|科学基金资助课题
收稿 期：1997．O1．22
‘
维普资讯
1O8 西北大学学报(自然科学版) 第27卷
回流3h，冷却后用去离子水洗至中性，干燥。然后将其放入 100mL一定pH值的0．10mol／L醋酸一醋
酸钠缓冲溶液中，在不断搅拌下加入适量的y_缩甘油丙基三甲氧基硅烷，反
文档评论（0）