巢式PCR及序列分析用于恙虫病早期诊断的实验研究.pdfVIP

2524 中国卫生检验杂志2009年 11月第 19卷 第 11期 ChineseJournal。fHealthLaborat。ryTechn。l0gyN。v2009；V0119 No 11 ， 【实验研究】 巢式PCR及序列分析用于恙虫病早期诊断的实验研究 于昌军 ，张守印孙，李国兰 ，徐雷 ，张景山。，付秀萍 ，贺金荣 (1．安徽省阜阳市疾病预防控制中心，安徽阜阳 236030； 2．传染病预防控制国家重点实验室，中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，北京 102206) [摘要] 目的：建立一种快速检测患者血液标本中恙虫病东方体的方法，用于恙虫病的早期实验室诊断。方法：收集患 者血液标本，提取全基因组 DNA；根据恙虫病东方体56kD蛋白编码基因特异基因引物 ，采用巢式PCR方法对其进行检 测，扩增的基因片段进行序列分析。结果：132份标本中，34份得到预期片段大小的PCR扩增产物，随机选取3份扩增产 物TA克隆后测序分析 ，证实PCR扩增产物为恙虫病东方体基因片段。结论：该方法灵敏、特异、快速，可直接用于患者 血液标本的恙虫病东方体特异性基因的检测 ，可为恙虫病东方体感染的早期诊断提供实验室依据。 [关键词] 恙虫病东方体；聚合酶链反应；序列分析 [中图分类号] R378 [文献标识码】 A [文章编号] 1004—8685(2009)l1—2524—02 Experimentalstudyforearlydiagnosisofscrubtyphusbynested——PCR andsequencea- nalysis YUChang-jun，‘ZHANGShou—yin“，LIG0“一lan，XULei，ZHANG ng—shah，FUXiu-ping，艘 fin—rong (1．FuyangCenterforDiseaseControlandPrevention，Fuyang236030，China；2．StateKeyLaboratoryforhffectiousDiseasePre— ventionandControl，NationalInstituteforCommunicableDiseaseControlandPrevention，ChineseCenterofrDiseaseControland Prevention，Beijing102206，China) [Abstract] 0bjective：TodeveloparapidmethodtodetectthepresenceofOrientiasutsugamushiinthebloodsamplesfrom suspectpatientsinfectedwithO．sutsugamushi．M ethods：ThewholebacterialgenomicDNA wasextractedfrom thepatientblood samples．TheprimerpairsusedforthenestedPCRweredesignedonthebasisofthenucleotidesequenceofthegenethatencodes the56一kDaantigen．ThePCRproductionsweresequenced．Results：34of132sampleswerepredictivegenesegmentsand3PCR productsweresequencedbyTA cloning．Thesequenceanalysisconfirmedthatthegenesegmentswereof0．sutsugamushi．Con- clusion：ItiSevidentthatthisassayisasensitive．specificandrapidmethodforthedetectionofO．tsutsugamushiinbloodsam— piesfrom suspectpatientanditcanbeusedofrtheearlydiagnosisofO．tsutsuga