山羊卵巢间质细胞分离方法的比较.pdfVIP

第 37卷 第 11期 西北农林科技大学学报 (自然科学版) V0l_37 NO．11 2009年 l1月 JournalofNorthwestAFUniversity(Nat．Sci．Ed．) Nov． 2009 山羊卵巢 间质细胞分离方法的比较 权 富生，余 源，苏会敏，华 松 ，郑月茂，刘 军，张 涌 (西北农林科技大学 动物医学院 动物生殖生理与胚胎工程农业部重点实验室 ，陕西 杨凌 712100) [摘 要] 【目的】比较体外条件下不同分离山羊卵巢间质细胞 (ovarianinterstitialcells)方法的效果。 【方法】 采用热消化法 、冷消化法 、单一酶消化法 (热消化法 ，用 I型 、Ⅳ型 、Ⅺ型胶原酶和 2．5g／L胰蛋 白酶+0．2g／LEDTA) 及 2步酶消化法分离山羊卵巢间质细胞。 【结果】热消化法得到的细胞数量较冷消化法多，且试验所用时间缩短，但 细胞活率降低。单一酶热消化法中，以1g／LXI型胶原酶效果最佳 ，适合体外培养。2步酶消化法以先胰蛋 白酶后Ⅺ 型胶原酶组的效果最佳 ，卵巢组织消化时间及体外培养首次换液时间均较短，适合于体外培养。 【结论】采用 1g／L Ⅺ型胶原酶单一酶热消化法或先胰蛋 白酶后Ⅺ型胶原酶 2步酶消化法 ，分离 山羊卵巢 间质细胞 的效果均较好 ，可作 为试验用卵巢 间质细胞 的理想分离方法 。 [关键词] 山羊；卵巢间质细胞；细胞分离；细胞培养 [中图分类号] $827．1 [文献标识码] A [文章编号] 1671—9387(2009)11-0013—06 Comparisonofthemethodsforisolatinggoatovarian interstitialcells QUAN Fu—sheng，YU Yuan，SU Hui—min，HUA Song，ZHENG Yue—mao， LIU Jun．ZHANG Yong (CollegeofVeterinar Medicine，NorthwestAFUniversity，YangLing，Shaanxi712100，China) Abstract：[Objective]Differentmethodsforisolatinggoatovarianinterstitialcells(OICs)werecorn— paredinordertoobtainadequatecellsforinvitrocultureinthisstudy．[Method]Theeffectofisolation wasinvestigatedindifferenttemperature(dissociationat37 ℃ andat4。C respectively)；methodsofisola— tinggoatOICswerecomparedbyasingleenzymedigestion treatment(collagenasetype工，Ⅳ ，Ⅺ and trypsinase+ EDTA，at37℃)andtwo—stepenzymaticdigestiontreatment．[Result]Theresultsshowed thatdissociationat37。C couldobtainadequatecellsandsaveanamountoftimethanat4℃ 。butremained lowcellviabilityrates；asasingleenzymedigestiontreatment，1g／LcollagenasetypeX1wasmostsuitable forcultureinvitro；asatwo-stepenzymatictreatment，Group 1I(trypsinase15minfirst，thencollagenase typeXI15min)couldobtainadequatecellswithhighviabilityrates，thedigestiontimeandthetimeoffirst exchange