转氢酶(GOT、GPT)的提取和测定(分光光度法).pptVIP

转氢酶(GOT、GPT)的提取和测定(分光光度法) 实验目的 熟悉转氨酶的测定方法。 实验原理 氨基酸分子上的氨基转移到α—酮酸分子上的反 应，称为转氨反应，由转氨酶催化。谷氨酸—草 酰乙酸转氨酶(GOT)和谷氨酸—丙酮酸转氨酶 (GPT)是两种最普遍的转氨酶。 GOT能催化如下反应： 此反应可与苹果酸脱氢酶相偶联，从而用来测定该酶的活性。 测定NADH在340nm或366nm处的吸光度的变化， 即可计算GOT的活性。 GPT能催化如下反应： 反应与乳酸脱氢酶相偶联， 生成的丙酮酸转化为乳酸，NADH变成NAD+ 测定340nm处NADH的OD值， 即可计算GPT的活性。 器材与试剂 1．实验仪器 搅拌器，紫外分光光度计，冷冻离心机，试管，烧杯 2．实验试剂 苹果酸脱氢酶，乳酸脱氢酶， 3mg／ml NADH，0.005mol／L α-酮戊二酸， 0．2mol／L D,L—天门冬氨酸盐， 0．2mol／L D,L—丙氨酸 (以上试剂均用0.05mol/L Tris—HCl(pH 7．2)缓冲液配制 3．实验材料 日本珊瑚树嫩叶 实验步骤 1．酶粗提液的制备 称取植物材料日本珊瑚树嫩叶 1g，按质量g:体积=1:9 的比例，加入9倍体积PH7.2的0.05mol/L Tris—HCl缓冲 液，用搅拌器进行搅拌